馬松染色的實驗步驟和注意事項

時間：2024/4/1閱讀：2350

馬松（Masson）染色是一種用于可視化組織纖維和炎性因子的染色方法。該技術充分利用了不同組織成分對陰離子燃料滲透性的差異。此法多用于觀察病變組織中纖維結締組織的增生和分布,纖維素腫瘤與肌源性腫瘤的鑒別，在肌肉疾病和心血管疾病的診斷中具有重要意義。

一、原理：

Masson染色，又成為馬松染色，是結締組織染色領域中經典的一種技術方法，專注于膠原纖維的染色。該方法被廣泛應用于組織學研究中，其主要目的是對胞核進行染色，并能夠有選擇地展示膠原纖維和肌纖維。

Masson染色的原理與陰離子染料分子的大小以及對組織的滲透性密切相關：分子的大小由其分子量決定，小分子量的染料能夠輕松穿透結構致密、滲透性低的組織，而大分子量則僅能進入結構疏松、滲透性較高的組織。然而，由于淡綠或苯胺藍的分子量較大，因此Masson染色后，肌纖維呈現紅色，而膠原纖維呈綠色或藍色，主要用于區分這兩者。

對石蠟包埋的大鼠氣道切片進行Masson染色

材料準備：4%甲醛固定液、二甲苯（AR級）、無水乙醇（AR級）、蘇木素染色液、鹽酸(AR級）、麗春紅、酸性品紅、磷鉬酸、苯胺藍、乙酸、中性樹膠

二、實驗步驟：

1、石蠟切片脫蠟至水：將切片依次置于二甲苯Ⅰ中浸泡20分鐘，二甲苯Ⅱ中浸泡20分鐘，無水乙醇Ⅰ中浸泡10分鐘，無水乙醇Ⅱ中浸泡10分鐘，95%酒精中浸泡5分鐘，90%酒精中浸泡5分鐘，80%酒精中浸泡5分鐘，70%酒精中浸泡5分鐘，最后進行蒸餾水洗。

2、對細胞核進行蘇鐵蘇木素染色：將切片浸入蘇鐵蘇木素染液中染色3-8分鐘，然后進行流水沖洗。

3、利用麗春紅-酸性品紅染色：將切片置于麗春紅-酸性品紅染液中進行染色5分鐘，然后使用0.2%冰醋酸進行沖洗。

4、磷鉬酸分化：將切片放入磷鉬酸中進行分化數秒，然后進行水洗。

5、苯胺藍染色：將切片放入苯胺藍染液中進行染色5分鐘，然后使用0.2%冰醋酸進行沖洗。

6、快速脫水和透明化：按照以下步驟進行脫水和透明化：依次將切片放入95%酒精Ⅰ中浸泡5分鐘，95%酒精Ⅱ中浸泡5分鐘，無水乙醇Ⅰ中浸泡5分鐘，無水乙醇Ⅱ中浸泡5分鐘，二甲苯Ⅰ中浸泡5分鐘，二甲苯Ⅱ中浸泡5分鐘，然后將切片從二甲苯中取出稍事晾干，最后使用中性樹膠封片。

7、鏡檢，并進行圖像采集和分析。

三、Masson染色實驗注意事項

1、嚴格掌握染色步驟，特別是在每個步驟之間進行充分洗滌是至關重要的。這有助于防止前一步驟的染料殘留對下一步染色產生影響。

2、組織的有效固定在染色過程中發揮著至關重要的作用。根據使用不同固定液的情況，可以靈活調整染色時間，以實現最佳染色效果。

3、使用0.2%冰醋酸水溶液進行洗滌，有助于產生清晰鮮艷的色調。

4、注意避免過度干燥：在染色過程結束后，務必防止樣本的過度干燥，以避免產生偽影。

5、苯胺藍和麗春紅要充分溶解然后過濾使用，不過濾的染液里面雜質過多，會阻礙染液和組織的結合緊密程度。

6、磷鉬酸水溶液對麗春紅和酸性復紅具有分化作用。在分化過程中，通過鏡下仔細控制，可以觀察到肌纖維和纖維素呈現紅色，而膠原纖維呈淡粉紅色即可。

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