無菌操作的注意事項（1）

細胞培養需要無菌技術。

什么是無菌技術？它和普通的實驗操作有什么區別？

首先，無菌技術是通過制定一個嚴格的操作規范來約束每個人做實驗的行為規范，從而排除潛在的污染可能。其原則就是在外部環境的微生物和細胞之間建立起一道屏障。

這道屏障有兩層含義：

1.讓細胞從物理上和外部非無菌的物品隔絕，不讓它們直接接觸

2.設計實驗操作時，所有步驟不能讓細胞和外部非無菌環境建立直接聯系

說白了，就是從各個環節、細節上去盡力做到沒有過失。

實驗操作臺面

在生物安全柜內進行細胞培養操作，操作臺面的使用有以下注意事項：

1 用之前，無論上一個使用者是否有擦拭臺面，你都需要重新擦拭一次，并使用70%乙醇消毒臺面，再使用紫外照射消毒30分鐘以上；

2 操作臺面內只放和本次實驗操作有關系的實驗工具，放置時按照分類和使用習慣來合理放置，切勿堆放在一起，也不要太靠近外部邊緣。

3.實驗過程中，如果培養瓶、培養皿、多孔板已打開蓋子，那么手部和任何其他物品都不應該越過敞口上方，否則將可能把微生物帶入器皿內；

4.所有的實驗操作，都應該在你的視野范圍內進行，也就是你在操作時，必須能看到實驗工具的整體，這是為了避免因盲區導致的實驗工具的末端觸碰到其他物品、臺面或你的身體部位，導致污染；

5.在實驗過程中，如果出現試劑、培養物液體滴在臺面，應停止當前操作，并立即用70%乙醇擦拭臺面；

6.實驗結束后，所有實驗物品都應搬離臺面，并再次擦拭清潔，最后用70%乙醇消毒；

個人衛生

1 穿實驗服、佩戴口罩和外科滅菌手套，長頭發的同學應把頭發扎在腦后，佩戴的手套的上緣應該與實驗服的袖口重疊在一起，就是把袖口末端塞進手套內；

2 手套在整個實驗過程中，不管是否有移出生物安全柜以外的范圍，都應間隔一段時間就使用70%乙醇擦拭一次；

3 如果感染了疾病，例如感冒，則應該暫緩實驗或佩戴面罩后再進入細胞間做實驗；

4 實驗過程中，如果實驗操作者和培養物之間有玻璃間隔，可以說話，但應該盡量少說話。

試劑和培養基

1 從外部采購的試劑和培養基，如果有外包裝，包括紙盒、薄膜等，都應該在細胞間外去除后，再使用70%乙醇消毒外表面后才放入操作臺面；

2 如果實驗過程中，這些試劑、培養基曾拿出過生物安全柜以外的范圍，例如放入了冰箱、培養箱、水槽等，需要重新擦拭干凈后用70%乙醇消毒，然后才可以再次放入操作臺面內。

培養物

1. 在每一次實驗之前，先用肉眼觀察細胞是否正常沒有污染，并在顯微鏡下再次檢查確認，如果污染則應停止該次實驗并清理掉細胞；細胞拿進生物安全柜之前，同樣需要用70%乙醇擦拭培養器皿外表面；

2 每一批次的細胞，在培養周期內，都應該取一部分出來單獨使用無抗生素的（血清）細胞培養基進行培養檢測，判斷其是否有潛在污染，這是為了排除抗生素對污染的干擾。

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