miRNA實驗解決方案（操作手冊）---第一章：miRNA簡介

一、miRNA的合成途徑
在動物細胞核中，miRNA基因的初級轉錄產物Pri-miRNA（長度大約為300～1000 nt）被RNase IIl-Drosha 酶切割成為發夾結構前體 miRNA（Pre-miRNA，長度大約為70～100nt）。經過初步剪切后，Pre-miRNA在轉運蛋白Exportin-5的作用下由細胞核內轉運到細胞質中，然后由另一種RNase Ill-Dicer 酶進一步切割產生成熟的miRNA（長度大約為21～23 nt）。成熟的miRNA與類似RISC的核糖體蛋白結合形成miRNA-RISC復合體，從而引起靶mRNA降解或者翻譯抑制。miRNA參與胚胎發育、細胞分化、細胞增殖、細胞凋亡、細胞死亡、免疫調節以及物質代謝等過程。

植物miRNA的形成過程全部是在細胞核中完成的，不存在Pre-miRNA從細胞核到細胞質轉運過程。首先，細胞核中編碼miRNA的基因在RNA聚合酶II的作用下轉錄形成Pri-miRNA，然后在Dicer酶-DCL1的作用下形成Pre-miRNA，DCL1繼續作用于Pre-miRNA從而形成成熟的miRNA，以上過程均在細胞核中完成。成熟的miRNA或者是在細胞核中與類似RISC的核糖體蛋白結合形成miRNA-RISC復合體，然后被核轉運蛋白HST運送到細胞質中，或者是先被HST運送到細胞質中，再與核糖體蛋白結合形成miRNA-RISC復合體。miRNA影響植物的生長發育、激素的調節、信號的轉導、植物病害和應答環境脅迫。

二、miRNA的特性

miRNA最典型的特性就是兩點--保守性和特異性。

·保守性

miRNA的結構和序列在物種之間幾乎保持不變。

結構的保守性：無論動物體還是植物體，miRNA的生成途徑都是由莖環結構的前體切割成為成熟體；

序列的保守性：miRNA的序列在不同物種中的差距極小。

·特異性

miRNA的表達分布具有時間區別和空間區別。

時間的特異性：在個體不同的發育階段，miRNA的表達量不同；

空間的特異性：在個體的不同組織中，miRNA的表達量不同。

三、miRNA序列查找

常用的查找miRNA數據庫--miRBase和TarBase。

該數據庫提供已發表的miRNA序列，注釋查詢，定位，發卡序列以及命名服務等信息的數據庫。

該數據庫人工搜集了實驗驗證過的miRNA的靶基因，包括在人、小鼠、果蠅、蠕蟲和斑馬魚中的miRNA的靶基因。

四、miRNA產品選擇指南

Vazyme 為您提供miRNA專用的提取、逆轉錄、實時熒光定量PCR檢測以及SmallRNA建庫系列產品，并搭配最適miRNA引物設計軟件，可直接進行成熟miRNA的實時熒光定量PCR高效檢測，及Small RNA的文庫構建。

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