細胞克隆篩選系統常用的方法有稀釋法和限稀法
細胞克隆篩選系統相比傳統篩選方法具有明顯優勢。傳統方法如有限稀釋法操作繁瑣、耗時長、效率低,且難以保證篩選的準確性和一致性,實現了自動化、高通量的篩選,大大提高了篩選效率,能夠在更短時間內處理大量細胞克隆,增加找到目標克隆的機會。同時,系統的準確性和可重復性保證了篩選結果的可靠性,為生命科學研究和新藥研發等領域提供了強有力的技術支持,推動了相關領域的發展和進步。
在生物制藥領域,可用于篩選高表達抗體、重組蛋白等藥物的細胞株,提高藥物的生產效率和質量。在基因編輯研究中,幫助篩選成功編輯基因的細胞克隆,加速基因功能研究和疾病模型構建。在細胞生物學基礎研究中,可用于篩選具有特定生物學特性的細胞克隆,如高侵襲性、高增殖能力等,以深入研究細胞的生命活動規律。
細胞克隆篩選系統的測定步驟:
1.細胞準備:
-細胞分離:采用合適的方法將混合的細胞樣品進行分離,以獲得單個細胞。常用的方法有稀釋法、限稀法和流式細胞術等。
-細胞培養:為分離得到的單個細胞提供適宜的培養環境,包括配制合適的細胞培養基,控制好溫度、CO2濃度等參數,使細胞能夠生長和分裂。
2.克隆形成:經過一段時間的培養,單個細胞會逐漸增殖形成細胞團塊,即克隆。當細胞團塊生長到一定大小,通常是細胞覆蓋率達到80 -90時,可進行后續篩選操作。
3.篩選標記確定:根據實驗目的和細胞特性,確定用于篩選的標記。標記可以是熒光標記、抗性基因標記等。例如,若使用熒光蛋白標記,可通過檢測熒光強度來篩選;若使用抗性基因標記,則可在培養基中加入相應的抗生素進行篩選。
4.篩選操作:
-基于標記篩選:對于帶有熒光標記的細胞,可使用熒光顯微鏡或流式細胞儀等設備,根據熒光強度篩選出陽性克??;對于帶有抗性基因標記的細胞,將細胞接種到含有相應抗生素的培養基中,只有攜帶抗性基因的細胞能夠生長,從而篩選出陽性克隆。
5.克隆驗證:對篩選出的陽性克隆進行進一步驗證,以確保其確實是所需的細胞克隆。
6.克隆擴增:將驗證后的陽性克隆進行擴增培養,以獲得足夠數量的細胞用于后續研究或應用。
