6
當前位置：北京博奧森生物技術有限公司>>技術文章>>蘇木素-伊紅染色試劑盒的使用說明
蘇木素-伊紅染色試劑盒的使用說明
蘇木素是一種有機物，化學式為C16H14O6，為褐色結晶粉末，用作核和染色質的染色劑。用于光度法測定釩、鋁、錫(IV)、氟、鈮、鉭等。
蘇木素和伊紅在組織學上被經常使用，與碘液不同，這是一種染色劑。其他常用的含有蘇木素的染色劑有磷鎢酸蘇木素染色劑，也就是磷鎢酸與蘇木素的混合物。蘇木素染色劑經常為組織的研究使用。 明礬和三價鐵鹽常常被用作媒染劑，展示核和細胞質結構。這些媒染劑的原理都是形成媒染劑-染料-組織復合體，從而顯示顏色。使用的鹽不同顏色也不同： 當用鐵鹽呈現深藍色顏色沉淀，用鋁鹽通常顯示藍白色。下面分別介紹鋁蘇木素溶液和鐵蘇木素溶液。
蘇木素-伊紅染色試劑盒使用說明：
1. 樣品處理
a) 對于石蠟切片：二甲苯中脫蠟5-10分鐘，換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘，無水乙醇5分鐘，90%乙醇2分鐘，70%乙醇2分鐘，蒸餾水2分鐘。
b) 對于冰凍切片：經固定的切片置蒸餾水2分鐘。
c) 對于培養細胞：用4%多聚甲醛固定10分鐘以上，蒸餾水洗滌2分鐘，換用新鮮的蒸餾水，再洗滌2分鐘。
2. 蘇木素-伊紅染色
a) 對于上述處理好的樣品，用蘇木素染色5-10分鐘(可以根據染色結果和要求調整時間)，回收染色液后，用自來水沖洗去除殘留的染色液，
b) 藍化和分色：用自來水沖洗，待切片變成藍色后，再用含0.5～1%鹽酸的70%酒精溶液進行分色，脫去多余的染料(因為蘇木精染色后，細胞核著色較深，細胞質及結締組織纖維等亦稍著色，影響下步染色及觀察)。然后再用自來水沖洗，使之藍化，需5～10分鐘。
c) 伊紅染色：切片用蒸餾水浸洗后，放入1%伊紅水溶液，浸染5～10分鐘。
d) 脫水：將切片用蒸餾水洗去附在載玻片上的染液后，經70%、80%、90%酒精分色及脫水，再經95%酒精和2次*脫水，每級一般為2分鐘。
e) 透明：切片入二甲苯2次，每次2分鐘。
f) 封固：從二甲苯中取出切片，在切片的組織上滴加適量樹膠，上面再加一蓋玻片， 使樹膠布滿于蓋玻片與載玻片之間的間隙，封固即告完成。將封好的切片標本放入烤箱，待蓋玻片粘著牢固后，即獲得可供長期觀察和保存的H·E染色標本。
3. 進行其它染色
如果進行免疫熒光染色，伊紅染色液染色后，70%乙醇洗滌2次，每次2分鐘，再用PBS或生理鹽水、TBS、TBST等用于免疫染色或熒光染料染色的溶液浸泡5分鐘，然后就可以進行免疫熒光染色或其它的染色。