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探索透明質酸行業(yè)的奧秘丨科技引領美麗與健康新風尚
透明質酸，又被稱為玻尿酸，是一種由 N - 乙酰氨基葡萄糖和 D - 葡萄糖醛酸組成的天然高分子粘多糖。它廣泛存在于人體的眼玻璃體、關節(jié)、臍帶、皮膚等部位，是細胞外基質的重要成分，具有獨特的保水性、潤滑性、黏彈性和良好的生物相容性。
透明質酸的應用
透明質酸應用范圍非常廣泛，比如作為眼部粘彈劑應用于人工晶體植入手術，保護眼內組織，提高手術成功率；作為骨科填充劑用于骨性關節(jié)炎和類風濕性關節(jié)炎等關節(jié)手術，緩解疼痛，改善關節(jié)功能；在創(chuàng)傷治療方面，還可促進皮膚傷口愈合，預防術后粘連，加速組織修復。
此外，透明質酸還廣泛應用于醫(yī)療美容領域，比如作為注射填充材料，達到面部除皺、塑形、豐唇等效果，讓肌膚煥發(fā)年輕光彩。也可作為化妝品的重要成分，起到深層補水鎖水，改善膚質，提升肌膚彈性和光澤度的作用。
透明質酸的分析和檢測
透明質酸領域主要的遵循的標準和指導原則有：
YY/T 1571-2017 組織工程醫(yī)療器械產品 透明質酸鈉
YY/T 0962-2021 整形手術用交聯透明質酸鈉凝膠
YY/T 0308-2015 醫(yī)用透明質酸鈉凝膠
透明質酸鈉類面部注射填充材料非臨床注冊申報資料基本要求
透明質酸鈉類面部注射填充材料注冊技術審查指導原則
根據上述法規(guī)中規(guī)定的各項檢測要求，安捷倫開發(fā)了針對透明質酸分析檢測的完整解決方案，涵蓋紅外鑒別、透明質酸含量、紫外吸收、分子量及分布系數、蛋白質含量、重金屬含量、乙醇殘留量、交聯劑殘留量、游離透明質酸含量等多個項目，提供一站式分析儀器服務，為透明質酸檢測實驗室保駕護航。以下為部分分析方案展示：
透明質酸分子量和分布系數測定
透明質酸根據聚合程度的不同，分子量從 5K 到 20M Da 不等。不同分子量透明質酸表現出不同的物理學和生物學特性，可用于不同的應用場景，醫(yī)美常用的透明質酸，分子量多在 1000K Da 以上。
圖 1. 透明質酸分子式
使用 Agilent SUPREMA 色譜柱搭配 GPC/SEC-MALS 可以對透明質酸進行分子量和質量分布分析，該色譜柱具有優(yōu)化的填料粒徑和孔徑，可提供穩(wěn)定的分離和可靠的結果。該方法的優(yōu)勢在于可獲得絕對摩爾質量，而帶濃度檢測器的傳統(tǒng) GPC/SEC 則只能提供表觀摩爾質量。
圖 2. 透明質酸樣品的曲線（紅色：RI - 檢測器曲線（濃度），黑色：實測摩爾質量 (MALLS)）
圖 3. 透明質酸樣品的摩爾質量分布與累積分布
透明質酸含量測定
在《醫(yī)用透明質酸鈉敷料》法規(guī)的征求意見稿中，給出了用液相色譜法測定透明質酸含量的方法，使用 Poroshell Hilic-z 色譜柱搭配 Agilent Infinity 系列 HPLC，可實現透明質酸鈉和軟骨素混合樣品酶解溶液的分離和檢測。
圖 4. 透明質酸鈉和軟骨素混合溶液酶解后的液相色譜結果（濃度約 0.025 mg/mL）
透明質酸產品添加劑檢測
氨基酸在線衍生檢測方案
使用 Agilent Infinity 系列 HPLC 自帶的程序進樣功能，可以實現氨基酸在線衍生和檢測。
圖 5. HPLC 在線衍生法測氨基酸含量
該方案無需額外的軟件或硬件成本，速度快，效率高。此外液相-單四極桿質譜還可實現氨基酸的直接檢測，無需衍生，進一步減少步驟和時間。
圖 6. LC-SQ 測氨基酸的典型譜圖及條件
利多卡因檢測方案
醫(yī)美注射劑里常添加利多卡因等麻醉劑，以降低注射過程中的痛感，因此此類產品中的利多卡因定性定量分析也是必不可少的項目。
圖 7. 用 HPLC 測利多卡因和 2,6 - 二甲基苯胺的典型譜圖及條件
透明質酸交聯劑殘留量檢測
天然的透明質酸結構松散，在這種松散狀態(tài)下，體內的半衰期只有 1～2 天。丁二醇縮水甘油醚 (BDDE) 等交聯劑可以把這些鏈條串聯起來，讓其形成 3D 網狀結構，從而降低代謝速度，最終讓其成為理想的填充材料。BDDE 殘留量的檢測通常使用氣相方法：
工藝雜質分析
透明質酸鈉生產和加工過程中，可能會有工藝雜質的殘留。下述實驗在 1260 Infinity II + 1290 ELSD 液相系統(tǒng)上，采用 Poroshell 120 HILIC-5OH 色譜柱在 HILIC 模式下開用了針對多種工藝雜質在交聯透明質酸鈉凝膠樣品中的殘留含量的分析方法，靈敏度滿足用戶檢測定量要求（40 ppm，即主成分含量的 0.2%）。
圖 8. HPLC 1260 + ELSD 檢測器測透明質酸樣品中的工藝雜質譜圖
采用通用型檢測器 1290 ELSD 不僅可以檢測到雜質成分同時也可以看到對應的鹽離子，可作為輔助參考。從終產品樣品峰與氯化鈉的疊加色譜圖和樣品配制信息來看，樣品中的基質峰應該主要來自于氯化鈉溶液和磷酸溶液，即氯離子、鈉離子和磷酸根離子，工藝雜質可以實現與基質峰的基線分離。
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