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與典同行|2020中國藥典增補版應對方案——氨基酸篇
2023年10月，國家藥品監督管理局發布了《中華人民共和國藥典》（2020年版）第一增補本，已于今年3月12日正式實施。其中收載新增品種47個，通用技術要求、指導原則6個；修訂或訂正品種646個、通用技術要求15個，以期更快更好地滿足藥品生產檢驗、監督管理等工作的需要。
截圖來源:國家藥品監督管理局網站
為更好地幫助客戶根據藥典新增通則和指導原則，開展相關檢測方法擴項和升級，賽默飛針對藥典的新增內容，特推出2020中國藥典增補版應對方案專題。第一期我們聚焦增補本（四部）新增的“9120氨基酸分析指導原則"。
氨基酸作為構成人體所需蛋白質的基本物質，通常紫外吸收較弱，直接使用紫外方法檢測干擾較大，靈敏度低。故藥典中將通過合適的衍生試劑經衍生化增加生色團后，再使用液相色譜結合紫外檢測等手段作為藥品中氨基酸測定的常用方法。目前氨基酸衍生化主要分為柱前和柱后衍生，柱前衍生又有離線和在線衍生。藥典中常用的衍生化試劑主要有異硫氰酸苯酯（PITC）、氨基甲酸酯（AQC）、鄰苯二甲醛（OPA）、芴甲（FMOC）和2,4-二硝基氟苯（DNFB）等，不同的衍生化試劑在反應原理、效率及穩定性等方面不盡相同。
最新公布的2020版中國藥典第一增補本（四部），新增的9120氨基酸分析指導原則，除了對分析方法進行了一定優化外，方法三——柱前OPA和FMOC衍生氨基酸測定法中提到了自動化柱前衍生法。
自動化在線衍生-紫外檢測法
賽默飛Vanquish液相色譜的自動進樣器配合變色龍軟件（Chromeleon），可提供用戶自定義進樣程序（User-Defined Program, UDP），從而替代人工，實現定制化、自動化的在線氨基酸衍生操作，契合2020藥典增補9120氨基酸指導原則中“衍生化操作也可由具有自動衍生功能的進樣器完成"的需求。
Vanquish 液相色譜和自動進樣器
在線針內衍生程序示例
（Position R:A2：硼酸鹽緩沖液；Position R:A3：OPA溶液；Position R:A4：FMOC溶液；Position R:A5：進樣稀釋液）（點擊查看大圖）
方法結合OPA和FMOC衍生試劑，Acclaim 120 C18色譜柱（PN: 059148）和Vanquish自動進樣器在線針內衍生功能，可以輕松實現氨基酸的在線自動化衍生、分析。無需手動衍生，節省了試劑消耗和人力成本，同時在線衍生程序編輯智能、簡便，大幅提升了氨基酸檢測效率。
自動在線衍生-紫外檢測法分析氨基酸
（點擊查看大圖）
另外，指導原則方法三中提到一級和二級氨基酸衍生物“經反相高效液相色譜分離后需用紫外光檢測器在338nm和262nm波長處分別檢測"。基于雙波長檢測要求，客戶通常會選擇二極管陣列檢測器，或單通道紫外檢測器結合波長切換等方法，而賽默飛Vanquish Core 紫外檢測器標配雙檢測通道特點，無需波長切換即可實現兩個波長的同時檢測，結果優于相關標準常規高效液相色譜方法的檢測靈敏度。
非衍生-電霧式檢測法
賽默飛電霧式檢測器（Charged Aerosol Detector，CAD）作為通用型檢測領域的典型代表，憑借其在靈敏度、重現性以及響應一致性等方面的顯著優勢而備受用戶關注和青睞，成為國內外各大藥企和科研院所在研發和質量控制等應用方面的一大利器。而基于大部分氨基酸紫外吸收較弱的特點，CAD又為氨基酸檢測，開辟了一條衍生方法以外的檢測捷徑。
Vanquish 電霧式檢測器（CAD）
CAD檢測器結合賽默飛Hypercarb多孔石墨化碳色譜柱（PN:35005-154630）在極性化合物分析方面的優勢，可以實現無需衍生的氨基酸直接分析，大大簡化了前處理步驟，也很好的規避了指導原則中提及的關于“二級氨基酸衍生重復性較差，OPA-氨基酸衍生物不穩定"等實際問題。兩種方法在重現性和靈敏度方面的表現基本相當。
非衍生-電霧式檢測法直接分析氨基酸
（點擊查看大圖）
總 結
賽默飛Vanquish液相色譜平臺，所具備的多種類型的檢測器和靈活可定制的程序軟件，結合兼具合規和創新的分析色譜柱，既可以滿足自動化在線氨基酸衍生分析要求，又能拓展無需衍生的CAD直接分析氨基酸方法。在滿足藥典第一增補本（四部）中的新增指導原則的同時，為相關制藥及食品等行業客戶在氨基酸檢測方面提供了更多更新穎的檢測思路和分析手段。