引言
由于與宿主的健康及疾病密切相關(guān)，腸道菌群組成的分析已成為健康科學(xué)領(lǐng)域的重點(diǎn)研究目標(biāo)。自1998年起，福州大學(xué)生物工程研究所的謝俊斌等[1]人相繼致力于液相色譜技術(shù)分離、分析細(xì)菌細(xì)胞的可能性。此后，陳強(qiáng)、賴偉萍、陳萍、林娟等[1]人應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)在細(xì)菌分離分析方面做了大量相關(guān)的研究。這些成果表明該技術(shù)作為細(xì)菌分離、分析的有效手段，不僅能夠分離不同種屬的細(xì)菌，而且對于處于不同生長階段、具有不同理化性質(zhì)的細(xì)菌都能夠?qū)崿F(xiàn)分離。
其中，高尿酸血癥是人體內(nèi)血尿酸含量顯著高于正常水平的代謝性疾病[2]，利用益生菌降解食物中外源性嘌呤類成分成為治療高尿酸血癥的新方法[3]。因此，利用HPLC從多株實(shí)驗(yàn)菌株中篩選降解核苷酸(腺苷酸、鳥苷酸)、核苷(腺苷、鳥苷)、嘌呤(黃嘌呤、次黃嘌呤、鳥嘌呤)、尿酸能力最強(qiáng)的益生菌具有重要作用[4]。
本方法是用LC3200系列產(chǎn)品（二元泵+UV+自產(chǎn)色譜柱）對菌群實(shí)驗(yàn)過程中的尿酸、肌苷、鳥苷進(jìn)行有效檢測及分離。
皖儀科技應(yīng)用方案
儀器配置
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1.測試條件
儀器：液相色譜儀LC3200系列配有UV檢測器；
色譜柱：皖儀自產(chǎn)WD-C18柱， 4.6×250mm, 5μm ；
柱溫：30℃；
流速：0.8mL/min；
進(jìn)樣量：10μL；
檢測器：UV檢測器；
檢測波長：254nm；
流動相：磷酸鹽緩沖液，PH=3.2；
2.試劑及實(shí)驗(yàn)材料
磷酸二氫鉀、四丁基硫酸氫銨；
一次性注射器（0.5-2mL）；
水系針式過濾器（0.22μm）；
3.標(biāo)樣制備
發(fā)酵液過0.22μm的濾膜，待測
4.測定方法
在上述測試條件下，待儀器穩(wěn)定后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液進(jìn)行上機(jī)測試。
測試結(jié)果
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1.對照品的測試
1.1尿酸對照
1.2腺苷、肌苷對照
由上圖可知，本方法對尿酸、腺苷、肌苷能有效的分離檢測。
2.樣品檢測分析
2.1尿酸樣品
2.2腺苷、肌苷樣品
總結(jié)
本次試驗(yàn)采用HPLC法檢測菌群代謝液中尿酸、腺苷、肌苷,方法簡便、快速、準(zhǔn)確,該方法具有良好的應(yīng)用前景，可以作為菌群移植、生物菌株等相關(guān)應(yīng)用分析。
參考文獻(xiàn)：
[1] 液相色譜技術(shù)在輔助腸道菌群分離、分析中的應(yīng)用基礎(chǔ)研究；
[2] 降血尿酸益生菌株的篩選和對高尿酸血癥模型大鼠作用機(jī)理的探索；
[3] 中山市橫欄地區(qū)高尿酸血癥患者實(shí)施多學(xué)科團(tuán)隊(duì)健康教育的效果研究；
[4] 綠球藻胞外多糖的提取和體外活性研究。
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