土壤有效硼試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
土壤中有效硼直接影響著植物的吸收和利用。
測定原理：
硼與甲亞胺在弱酸條件下形成棕黃色配合物，在420nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器：
天平、常溫離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制：
試劑一：液體5mL×1支，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加8mL蒸餾水溶解，加0.125mL乙酸。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加4mL蒸餾水溶解。
樣本處理：
新鮮土樣風干，過100目篩，按照土壤質量（g）：蒸餾水體積（mL）為1：2的比例（建議稱取約0.5g土樣，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，沸水中浸提10min，待自然冷卻，加入50μL試劑一，震蕩5min，8000g ，25℃離心10min，取上清液待測。
測定操作表：
空白管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 40 | |
試劑二（μL） | 80 | 80 |
試劑三（μL） | 40 | 40 |
H2O（μL） | 80 | 40 |
充分混勻，25℃黑暗中靜置1h | ||
于微量石英比色皿/96孔板，蒸餾水調零，測定420nm處吸光值A，分別記為A空白管和A測定管，△A=A測定管-A空白管 | ||
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.3897x - 0.021，R2 = 0.9995
全硼含量（mg/kg）=（△A+0.021）÷ 0.3897÷（W÷V樣總）
= 2.56×（△A+0.021）÷W
V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g
b. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.1949x - 0.021，R2 = 0.9995
有效硼含量（mg/kg）=（△A+0.021）÷ 0.1949÷（W÷V樣總）
=5.13×（△A+0.021）÷W
V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g
注意事項：
1. 配制好的試劑二4℃保存不可超過7天。
2. 顯色時嚴格控制溫度并且避光，以免顯色劑見光分解。
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