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            菌落計數與面積測量的高效化

            閱讀:412      發(fā)布時間:2024-7-29
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            菌落計數與面積測量

            為確保產品安全性而實施的微生物檢查或遺傳毒性試驗。在微生物檢查中,對培養(yǎng)基上活菌菌落數量的經時變化進行計數,以計算菌數量的形式并進行微生物評價。另外,在作為一種遺傳毒性試驗的Ames試驗(艾姆斯試驗)中,向原本無法自己產生氨基酸的菌株投入試驗物質,根據其中形成的菌落及其比重來評價誘發(fā)突變性。
            在此類實驗中,需要對隨著時間變化而在培養(yǎng)板上增殖,變化的活細胞或菌落進行區(qū)分測量,如果憑借測量人員的目視測量計數,容易產生數值的偏差或人為誤差,影響對該培養(yǎng)板的準確評價。以高倍率觀察培養(yǎng)板或計數并評價形成的菌落時,由于視野變窄無法快速觀察培養(yǎng)板整體的情況,需要花費大量時間逐一視野查看計數。而且還有很大的風險漏看錯看。

            另外,在再生醫(yī)療研究領域,觀察培養(yǎng)板整體并準確分析iPS細胞菌落數量是評價該實驗的重要方法。并且,在以改善培養(yǎng)工序以及提高培養(yǎng)效率為目的的實驗中,需要大量進行針對不同條件、培養(yǎng)基種類以及傳代方法等對比試驗。
            但是,在菌落計數或測量中,因各工作人員手動計數的標準以及方法不同造成的結果的偏差和人為誤差,會影響統(tǒng)計結果的準確性。尤其是iPS細胞在培養(yǎng)過程中形成菌落的同時細胞也在自我增殖,菌落內的細胞形態(tài)會發(fā)生變化。因此,細胞間的界限可能難以判斷,更增大了目視計數的難度進而影響評價的準確性。

            在發(fā)生手動計數錯誤或自動計數時發(fā)生誤檢時,需要花費大量時間和經費重新開啟實驗。在各種檢查或測試、實驗等中,在人數有限的情況下消除勞力與時間上的浪費,并取得更多成果,必須同時提高數據準確性與工作效率。

            解決菌落計數與面積測量的案例

            基恩士的一體化熒光顯微成像系統(tǒng)BZ-X800,僅需1臺即可以多功能支持熒光、相位差、明視場觀察及各種拍攝方法。還可實現培養(yǎng)板的整體觀察、定量菌落計數及面積測量等,解決實驗、研究或試驗、檢查中的諸多課題。
            結合使用電動載物臺的全自動圖像拼接模塊來觀察培養(yǎng)板整體,以及對iPS細胞培養(yǎng)板的整體圖像進行菌落分析的案例,介紹導入BZ-X800的優(yōu)點。

            使用大型電動載物臺進行的培養(yǎng)板整體觀察

            使用顯微鏡在高倍率下觀察菌落時,由于視野變窄,必須一邊保存載物臺坐標逐一移動視野觀察局部圖像。因此,無法將培養(yǎng)板整體納入一個視野內的同時以高倍率觀察微小菌落。也可將高倍率拍攝的圖像經過圖像處理拼接成1張圖像,以獲得大視野圖像,但通過手動操作進行拼接作業(yè)不僅難度高,還需花費大量時間。綜上所述,如何在經時變化的活細胞或活菌不產生影響的情況下,快速觀察培養(yǎng)板整體尤為重要。

            BZ-X800搭載大型電動載物臺,可按照程序在X、Y、Z軸方向上自動移動的同時,在高倍率下連續(xù)拍攝圖像,并自動進行圖像拼接,可輕松獲取培養(yǎng)板整體的高分辨率圖像。即可觀察培養(yǎng)板整體的大視野圖像,也可觀察高倍率下菌落的形態(tài),在不遺漏且不會遺失觀察坐標的情況下進行觀察。
            另外,可對多孔培養(yǎng)板中的多個孔自動執(zhí)行批量圖像拼接。

            培養(yǎng)板整體中iPS細胞菌落計數與面積測量的高效化案例

            活細胞或活菌的經時變化影響到對培養(yǎng)板內的分析結果與評價,因此重要的是快速獲得定量分析結果。
            以下圖像是對使用BZ-X800的圖像拼接獲得的iPS細胞培養(yǎng)板單孔圖像,使用“混合細胞計數"自動實施菌落計數及面積測量的案例。通過大視野觀察對培養(yǎng)板整體中菌落的數量及面積的平均、標準偏差、總數值進行定量測量,可快速獲得分析結果。由此,得以消除手動計數所需的大量時間與勞力,以及發(fā)生人為誤差的風險。

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            使用多孔培養(yǎng)板時,通過使用BZ-X800的“宏細胞計數",可以以其中1張圖像的分析條件作為模板,在同一條件下批量自動測量其他的多張圖像。
            采用人工計數對多個孔的菌落進行分析,不僅花費大量的時間與精力,還因不同的測量人員因操作方法不一而發(fā)生分析結果及評價上的偏差,BZ-X800則可在短時間內輕松實現定量測量與評價。

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            如果引進一體化熒光顯微成像系統(tǒng)BZ-X800


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