免疫細胞化學 (ICC) 是一種使用熒光抗體或染料來檢測細胞內靶抗原的技術。那么你知道免疫細胞（ICC）實驗步驟有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！

一、細胞培養/固定

很多抗原在離體組織中只存在很短時間，自溶（autolysis）和壞死（necrosis）使得抗原進一步降解，組織形態和結構被破壞。樣品浸泡在合適的固定液中，固定液完quan滲透組織，使蛋白失去活性，并且使組織被保存、穩定在接近 in vivo 狀態。

二、通透處理

通透即為對細胞膜進行打孔處理，使抗體能進入到細胞中和抗原發生結合。通常，當抗體檢測細胞內蛋白時（包括抗原表位在胞內段的跨膜蛋白），需要對細胞進行通透，一般將細胞樣品在含 0.1-0.25% Triton X-100的PBS中孵育5-10分鐘。

三、封閉

對樣本進行封閉，同樣是為了阻斷抗體抗原之間的非特異結合，降低背景和潛在假陽性染色。

四、一抗孵育

ICC 實驗的成功也依賴于靶標抗原特異性結合的一抗。

五、二抗孵育

對于間接檢測，二抗是成功顯示一抗分布的關鍵。使用二抗和相關檢測系統能夠擴增信號，因為不止一個二抗分子與單個一抗結合。

化學顯色與熒光檢測：您可以選擇化學顯色法，使用酶標記的二抗，也可以選擇熒光法（免疫熒光），使用熒光染料標記的二抗進行檢測。

六、封片觀察

顯色完成后，通常會對細胞進行復染，復染劑對特定的細胞結構進行染色，增加染色對比效果，明確細胞或亞細胞定位。

復染試劑的選擇取決于您對樣品的染色方式：顯色劑（一種在標準光學顯微鏡下可見的染料）或熒光染色。

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