Phos-tag™是一種可特異性捕獲磷酸化Ser、Thr、Tyr等物質的功能分子，由日本廣島大學大學院醫齒藥學綜合研究科醫學品分子機能科學研究室開發。以Phos-tag™ 丙烯酰胺（Phos-tag™ Acrylamide）為首開發的多種Phos-tag™ 產品被應用于世界范圍內的基礎研究，并且在GPCR通路及Wnt通路的信號轉導分析方面也取得了優秀成果。

一、分離磷酸化蛋白

在制備SDS-PAGE預制膠過程中加入Phos-tag™ Acrylamide，即可根據磷酸化水平和磷酸化位點分離磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白。

原理：

1. 電泳中的磷酸化蛋白捕獲2個二價金屬離子。

2. 磷酸化水平越高電泳速度越慢。

3. 根據磷酸化水平進行分離。（即使磷酸化位點的數目相同，但只要位置不同就能分離）

特點：

可檢測市售抗磷酸化抗體無法檢測的磷酸化蛋白。

可檢測磷酸化水平及磷酸化位點。

可同時檢測磷酸化與非磷酸化

二、實驗數據

①α-casein去磷酸化反應隨時間的變化

使用堿性磷酸酶隨時間（孵育時間：0-120 min）處理α-casein，并使用Phos-tag™ SDS-PAGE和常規SDS-PAGE分離去磷酸化處理的樣品。

② 野生型/突變型Noxa表達的MCL-1磷酸化水平變化

使野生型（wt）及突變型（3E，KR，5A）的Noxa在肺小細胞癌細胞株H209細胞中表達，并進行細胞溶質（Cytosol）組分和HM（Heavy Membrane，含線粒體較多）組分分離。通過Phos-tag™ SDS-PAGE分離出樣品中的MCL-1（40 kDa），使用抗MCL-1抗體進行Western blotting檢測。

③二維電泳中的應用： hnRNP K異構體的磷酸化分析

●檢測磷酸化蛋白

Phos-tag™ Biotin

Phos-tag™ Biotin是Phos-tag™ 分子與生物素結合的產品，無需使用抗磷酸化抗體即可檢測與PVDF膜上的磷酸化蛋白。本產品進需配合“HRP 結合親和素"進行使用。

特點

1. 結合與磷酸化種類無關

2. 推薦用于檢測無合適的抗磷酸化抗體的蛋白

●Phos-tag™ 凝膠熒光染料

Phos-tag™ 凝膠熒光染料，是一種可在生理 pH 范圍內，對凝膠中的磷酸化蛋白進行染色的熒光染料。進行SDS-PAGE后，用本產品處理聚丙烯酰胺凝膠，可以對磷酸化蛋白進行特異性染色。本系列有波長不同的Yellow（黃）、Magenta（品紅）、Cyan（藍綠）、Aqua（淺綠）四種顏色。每管規格為0.2 mg，可對約20個迷你凝膠進行染色。

使用Phos-tag™ 熒光凝膠染色，篩選組氨酸激酶抑制劑。結果表明，激酶抑制劑對磷酸化存在濃度依賴性抑制。

天津益元利康生物科技有限公司，代理Wako磷酸化蛋白分析用——Phos-tag™ 系列產品，歡迎選購！