限制性內切酶（restriction endonuclease，REases）是一種能夠識別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶，簡稱限制酶。下面讓我們一起來看看NEB限制性內切酶AlwI(R0513S)的產品介紹吧！

NEB限制性內切酶AlwI是一種可識別GGATCNNNN^N_ 序列的限制性內切酶，來源于大腸桿菌菌株，攜帶有克隆自洛菲不動桿菌（Acinetobacter lwoffii）（R. Morgan）的 AlwI 基因。NEB酶AlwI 切割產生的 DNA 片段含有單堿基突出的 5′ 末端，它比平末端更難連接。該酶對dcm甲基化和CpG甲基化不敏感，dam 甲基化阻斷該酶酶切。對于不能熱失活的酶，NEB建議進行柱純化，或脂糖凝膠電泳后切膠回收，或酚/氯仿抽提。

優化限制性核酸內切酶反應：

在建立限制性核酸內切酶消化物時，需要考慮幾個關鍵因素。在正確的反應體積中使用適量的DNA、酶和緩沖液組分，可以達到最佳消化效果。根據定義，1 單位的限制性內切酶將在 60 分鐘內在 50 μl 反應中wan全消化 1 μg 底物 DNA。這種酶：DNA：反應體積比可用作設計反應的指南。然而，大多數研究人員遵循列出的“典型"反應條件，建議過度消化 5-10 倍，以克服 DNA 來源、數量和純度的可變性。

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