在人細(xì)胞ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，我們或多或少會(huì)遇到樣本濃度接近試劑盒靈敏度，樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，尤其是血清和血漿樣本，這可能是基質(zhì)效應(yīng)的結(jié)果。那么什么是基質(zhì)效應(yīng)呢？
基質(zhì)是指除目標(biāo)分析物之外的樣品部分。因?yàn)榛|(zhì)成分會(huì)顯著干擾分析過程，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。這些效應(yīng)在業(yè)內(nèi)統(tǒng)稱為矩陣效應(yīng)。這是人細(xì)胞ELISA試劑盒研發(fā)和使用中需要避免的雷。
當(dāng)單個(gè)樣品或少量樣品的數(shù)值低于空白值時(shí)，可能是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)了問題。這時(shí)候就要增加重復(fù)，提高操作技術(shù)。當(dāng)許多樣品低于空白值時(shí)，應(yīng)考慮基體效應(yīng)的影響，建立校正曲線進(jìn)行修正。基質(zhì)效應(yīng)的原因很復(fù)雜，有可能是樣品中的基質(zhì)導(dǎo)致原抗體的結(jié)合能力下降，導(dǎo)致樣品值低于空白值的現(xiàn)象。因此，無法計(jì)算樣本值，該值可能為負(fù)值。
雖然原因復(fù)雜，但有方法可以用來評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。
1、線性稀釋。一般來說，抗原與捕獲抗體和檢測(cè)抗體的結(jié)合作用是很強(qiáng)的。樣品濃度的稀釋不影響它們的結(jié)合，但引起基質(zhì)效應(yīng)的非特異性結(jié)合力要弱得多。如果樣品被連續(xù)稀釋，非特異性結(jié)合將導(dǎo)致干燥。干擾會(huì)逐漸減少，測(cè)量值會(huì)更接近真實(shí)值。當(dāng)沒有基體效應(yīng)時(shí)，無論如何稀釋，測(cè)得的值都與真實(shí)值一致。但當(dāng)存在基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)引起非特異性結(jié)合率的降低，測(cè)得的值會(huì)相應(yīng)發(fā)生較大變化。
2、摻入回收率實(shí)驗(yàn)，在該實(shí)驗(yàn)中，將低、中、高濃度的分析物摻入到已測(cè)量濃度的樣品中。摻入前后測(cè)得的濃度增加與摻入濃度的比率是回收率，回收率以百分比表示。回收率在80%-120%之間才能達(dá)標(biāo)。
那么我們?nèi)绾伪苊馊思?xì)胞ELISA試劑盒中的基質(zhì)效應(yīng)呢？
通過優(yōu)化產(chǎn)品開發(fā)階段，可以盡可能消除基質(zhì)效應(yīng)。在ELISA試劑盒的研制過程中，不使用人或動(dòng)物的血清和血漿作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋劑，只能使用仿制品。我們定制的緩沖系統(tǒng)，這些優(yōu)化的緩沖系統(tǒng)可以很好地消除基質(zhì)效應(yīng)。在檢測(cè)一種分析物時(shí)，如果其他相關(guān)因素或類似的結(jié)構(gòu)因素有非特異性結(jié)合，也會(huì)導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)。所以我們做了很多交叉反應(yīng)，保證沒有明顯的交叉反應(yīng)和干擾。而且我們的試劑盒必須通過嚴(yán)格的基質(zhì)效應(yīng)測(cè)試，包括線性稀釋和摻入回收率測(cè)試，并在說明書中記錄測(cè)試結(jié)果。
