熒光團是一種熒光染料，可作為蛋白質、組織和細胞標記的熒光標記物，以供熒光顯微鏡進行檢測。熒光團的運作方式是吸收特定波長區域（又稱為激發能量范圍）的能量，然后在其他特定波長區域（又稱為發射能量范圍）內重新發射該能量。

圖1：常見熒光團光譜曲線

一般來說，熒光團會被高頻率的照明（紫外、紫色或藍色光譜區域內的波長）激發或吸收能量，然后會在頻率較低的照明（綠色、紅色或近紅外光譜區域內的波長）中發射該能量。每種熒光團都具備了能夠高效吸收能量的波長，又稱為峰值激發波長λ (nm)，以及能夠將所吸收到的最多能量重新發射的對應波長，又稱為峰值發射波長λ (nm)（詳情請參閱交互式濾光片圖表）。選擇單獨光學濾光片以及最大透射的波長將能夠確保您獲得清晰度最高的熒光圖像。

在熒光顯微鏡應用中，典型的熒光顯微鏡設置包含了三個濾光片。有關典型熒光顯微鏡設置，請參閱圖2。

濾光片一：激發濾光片

激發濾光片是放置于熒光顯微鏡的照明路徑內。其目的是用于過濾光源中的所有波長，除了受檢測熒光團的激發能量范圍。濾光片的最小透射(%)是決定圖像亮度和清晰度的關鍵。對于任何激發濾光片，愛特蒙特光學建議使用的最小透射為40%，理想的透射為>85%。激發濾光片的帶寬應出現在熒光團的激發能量范圍內，而理想的濾光片的中心波長(CWL)應盡可能與受檢測的熒光團的峰值激發波長的長度相近。由于光密度(OD)是決定濾光片如何截止帶寬中波長的衡量標準，因此激發濾光片的光密度是圖像背景暗度的關鍵。愛特蒙特光學建議使用的最小光密度為3.0，理想的光密度為6.0。具備理想的中心波長、最小透射(%)以及光密度的光學濾光片能夠提供清晰度最高的圖像，而濾光片的最深截止則能夠確保檢測到最微弱的發射信號。

圖2：典型熒光顯微鏡設置

濾光片二：發射濾光片

發射濾光片是放置于熒光顯微鏡的成像路徑內。其目的是用于過濾受檢測熒光團的整個激發能量范圍，以及透射該熒光團的發射能量范圍。對于發射濾光片，我們所建議的最小透射、帶寬、光密度以及中心波長均與激發濾光片相同。同樣的，具備理想的中心波長、最小透射(%)以及光密度的發射濾光片能夠提供清晰度最高的圖像，而濾光片的最深截止則能夠確保檢測到最微弱的發射信號。

濾光片三：二向色性濾光片或分光器

二向色性濾光片或分光器是以45°角放置于激發濾光片與發射濾光片之間。其目的是用于將激發信號反射至受檢測的熒光團，然后將發射信號透射至檢測設備。理想的二向色性濾光片或分光器應能夠在最大反射率和最大透射率之間迅速過渡，激發濾光片帶寬的理想反射率為>95%，而發射濾光片帶寬的理想透射率為>90%。選擇濾光片時，應該將熒光團的相交波長(λ)考慮在內，以確保獲得z低雜散光和最高信噪比的熒光圖像。若您在選擇合適的二向色性濾光片或分光器上拿不定主意，愛特蒙特光學可以協助您選擇一個適用于您應用程序的光學濾光片。立即聯系我們，與我們討論您的光學濾光片需求。