每天孝敬細胞比孝敬爹媽還用心，培養細胞時有哪些慘痛經驗教訓可以分享呢？一起來看看神人神評論。

 

站友：早走早脫身，從此專注黑生物

 

1.嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干。

 

2.不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套。

 

3.有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測。

 

4. 水浴鍋很臟，生化培養箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換（滅菌水加進去）。

 

5. 晚上離開的時候給細胞房照紫外，超凈臺是用完就開。

 

6. 的是同一時間就你一個人在用細胞房在養細胞。

 

站友：非科班出身經驗分享

 

養過一段時間的 Hela和 Siha，都是跟別人要的，分享一點經驗。

 

1. 別怕浪費。槍頭什么的只要有可能污染就換，如果用酒精燈就什么都稍微烤一下，別直接放到火上，離一段距離。

 

2. 動作要既輕柔又有力。動作太重會有一堆一堆的氣泡，動作太輕就吹不下來...剛開始的時候吹細胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后來就是吹的時候槍里的培養基不要一次全都壓出來，留一點，槍的zui頭部盡量深的在液面以下。

 

3. 離開過操作臺的東西再進操作臺之前一定要用酒精噴一遍，包括一切實驗耗材、儀器、以及你帶著手套的手。

 

4. 實驗結束后對實驗臺的消毒。紫外什么的，用前用后都照個 30 分鐘。

 

5. 身體的各個部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比如實驗臺，又比如培養箱內部。

 

6. 細胞的密度根據細胞的性質、傳代的時間以及自己的心情來定。培養基的話zui多zui多不要超過 2 天就要換一次。細胞可以不傳代，但是培養基是一定要換的。

 

大概就是，不該碰的地方不碰，有影響的地方少碰；該使勁的時候不含糊，不該使勁的地方一定忍住。如果是比較簡陋的操作臺就一定要擺個酒精燈，所有操作緊密圍繞在酒精燈周圍進行。如果是臺子就多用酒精噴噴。感覺生物的實驗，心疼錢就還是不要做了。

 

zui后一點點非科班的經驗。癌細胞真是堅挺。有一次實在是不想傳了，放了 5 天吧，感覺都長了幾層出來，培養基都黃了。抱著試一試的心情傳了一次，又堅強的活過來了。當然，狀態肯定也差的很了。

 

站友：換種心情，好好生活！

 

養了三年細胞，各種腫瘤細胞，說一點自己的看法：

 

1. 我們實驗室細胞基本上都是在 ATCC（ATCC: The Global Bioresource Center）買的，一個新細胞在養之前，可以看看 ATCC上面說明的細胞特點，包括細胞正常生長的狀態圖、傳代、培養基的類型等。

 

2. 不同細胞生長周期不同，有的生長很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了，有的又是特別慢，等的人心焦，BT474 就是，傳代是一分二，復蘇起始的時候兩周多才能長滿，所以就要在培養細胞的過程中多多摸索了。

 

3. 對于嬌弱的細胞，就得細心呵護了，胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉速和時間，每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。

 

4. 凍存細胞復蘇后第二天更換一次培養基。

 

5. 培養箱隔一段時間*用酒精棉擦洗一次。

 

6. 養細胞zui大的教訓：不能偷懶！

 

站友：細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀。

 

1. 不管買的細胞、惠贈的細胞，剛拿到手趕緊做兩件事：檢測是否有支原體污染；迅速擴增凍存。

 

2. 發現有污染迅速處理掉，特別是當你養了很多種細胞時；細菌污染，真菌污染很容易發現，支原體污染的話，細胞會長的慢，買個支原體檢測的kit 定期檢測一下。

 

3. 細胞房日常的值日清潔是必須的，此外還要定期熏蒸。

 

4. 細胞的傳代一定要規律，保持相同的 confluency 和傳代時間間隔，不要隨心所欲或者拖延。

 

5. 注意個人衛生。

 

站友：靠內心感動細胞

 

1. 自己的細胞自己養，血的教訓。

 

2. 在生物安全柜（或者超凈臺），槍頭，血清管，血清，培養基，瓶子都足夠好，并且細胞房有良好的衛生措施（比如隔離服，手套，口罩，清潔，HEPA等等）且不違法操作原則的情況下，你其實很難污染。

 

3. 上述條件不完備的情況下，就要多注意無菌操作了：比如要用的東西提前拿到臺子里照啊（不過這個其實也不大好，因為會擋住紫外線），使用前 SDS+酒精擦臺子，進出超凈臺一定要酒精擦手。

 

4. 少對細胞說話，多靠內心來感動它們（是的！心不誠是不可以的！）至少 1 天看 1 次。

 

站友：養細胞很容易

 

養細胞真的不難，zui關鍵幾點：

 

1. 所有的東西使用的，如果你用的血清、培養皿、培養基、胰酶什么的都是進口的，真的很難相信你會把細胞養壞。

 

2. 動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態差，很多時候是傳代的原因。

 

3. 有時間的話，需要細胞計數，傳相應數目的細胞到培養皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措。

 

4. 要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，細胞房的實驗穿插進行，可以節省很多時間，也不會耽誤別人的實驗。

 

5. 個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，zui近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。

 

6. 細胞房不能進去太多人，避免相互干擾。

 

站友：細胞養不好，自掛東南枝

 

現在一大型藥企養細胞做檢測，工作量很大，很多地方都沒辦法非常仔細的做。但是兩年下來只出現過一次污染，總結一下心得：

 

1. 好的潔凈室，空調系統跟得上。

 

2. 好的生物安全柜，硬件跟的上。

 

3. 瓶子移液器吸頭大都是進口，耗材跟的上。除了這些就是自己的操作習慣了。

 

4. 任何東西不要從敞開的瓶口上面經過。

 

5. 雖然酒精燈會干擾安全柜氣流但是還是需要一盞用來勤燒瓶口。

 

6. 實驗時所用材料的位置擺放要順手，污染源和已滅菌物品要分開放置。

 

站友：養細胞就像打仗

 

細胞飼養涵蓋的內容太廣了，而且不同種類細胞的飼養難度以及技術要求不同，腫瘤細胞，成纖維細胞，上皮細胞...甚至各類干細胞...每一種都有自己的生長要求。如果只是單純的一般性操作，大同小異，個人覺得練好技術的情況下注意幾點就好:

 

1. 各種無菌，從培養基到操作過程再到培養箱，時刻注意無菌。本人曾經所在的實驗室出現過大規模污染并zui終導致所有細胞集體毀滅...教訓慘痛。

 

2. 培養基的配制一定要做好梯度摸索并詳細記錄，否則細胞死都不知道怎么死的。

 

3. 盡量提高操作熟練度，減少培養皿在培養箱外的滯留時間，細胞很脆弱，經不起折騰，不像人，熱了有空調，冷了能烤火。

 

4. 把握好培養基更換的時間，不同細胞類型時間不同，早了浪費試劑，晚了可能全軍覆沒。

 

5. 經驗很重要，養細胞的很多經驗你是無法在公開的書籍和資料上找到的。多向實驗室前輩學習，他們會讓你少走很多彎路，真的。

 

養細胞就像打仗，知彼知己，百戰不殆。只有了解你養的對象，才能把他養好。

 

站友：細胞就是矯情

 

養細胞細胞這個東西呢有的時候真說不清。養過一段時間的巨噬細胞，一開始操作各種謹慎小心，隨時默念各種無菌原則，培養基什么的都用的進口的，但細胞就是萎靡不振，兩個多星期過后實在懶得管，換液等操作也很隨意的草草進行，酒精也懶得噴，結果這貨卻開始瘋長，過了幾天居然達到一天要傳一次代，而且數量甚至可以一傳三， 所以說，有的細胞就是矯情。