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            首頁   >>   技術文章   >>   【瑞士步琦】【應用】同一系統上使用Flash和制備HPLC色譜純化多肽
            
		
            
	
            
        
            
        
            
	
            
				
            
					
            
						
            
						
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            【瑞士步琦】【應用】同一系統上使用Flash和制備HPLC色譜純化多肽
            
        			
            閱讀：176      發布時間：2025-5-29
        				
            
							
				
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            同一系統上使用
            Flash和制備HPLC色譜純化多肽
            色譜應用
            "

            1


            簡介
            固相多肽合成（SPPS）是科學研究、臨床和商業合成領域常見的多肽合成路徑。由于反應通常產生多種長度的肽鏈，所以這些反應混合物的提純非常具有挑戰性。使用大孔反相填料色譜柱和制備 HPLC 能夠得到高純度的結果，所以常用于此類純化。不過，多肽反應通常很復雜，含有很多雜質。將此樣品引入昂貴的制備 HPLC 柱和系統中會產生額外的消耗，而且需要較多時間進行樣品純化。Pure Prep 系統既能運行制備 HPLC 也能運行 Flash 色譜模式，令您從容選擇使用制備 HPLC 還是更經濟的 Flash 色譜。FlashPure 大孔 Flash 柱填裝高效的 20μm 粒徑的填料，分離度高，這是分離很靠近的化合物分子諸如多肽等特別需要的。在此我們證明，如何在同一系統上使用 FlashPure Flash 柱和 HPLC 柱純化復雜的多肽反應物，并使最終純度超過95%。

            2


            實驗材料和方法
            樣品
            樣品1（Flash色譜）
            樣品2（制備HPLC）
            多肽混合物
            25mg 反應混合物
            15mg 反應混合物
            目標多肽鏈長
            20 個氨基酸
            15 個氨基酸
            多肽序列
            CQQYNRPYXXXGGTKLEIKR-NH2
            CAKHYYYGGXXXMDY-NH2

            純化
            Flash 色譜
            Prep 色譜
            儀器系統
            Pure flash 模式
            Pure Prep 模式
            Flash 柱芯/色譜柱
            FlashPure WP C18 12g
            Vydac 150HC，22×150mm，10um
            梯度/檢測器
            A=水
            B=乙腈+0.1%TFA
            A=水
            B=乙腈+0.1%TFA
            進樣模式
            液體進樣
            液體進樣

            分析
            分析型 HPLC
            系統
            Agilent 1200
            色譜柱
            Kromasil C18 100×4.6mm，3um
            流動相
            A=水+0.1%TFA
            B=20%水，80%乙腈+0.1%TFA
            梯度
            樣品1：20分鐘內10-50%B
            樣品2：20分鐘內15-55%B
            檢測波長
            UV214nm
            進樣模式
            液體進樣-多種進樣體積

            3


            結果與討論


            純度結果
            純化前純度
            純化后純度
            樣品1（Flash 色譜純化）
            58.5%
            95%
            樣品2（Prep 色譜純化）
            55.9%
            98.9%

            4


            結論
            通過以上實驗證明：使用反相 Flash 柱和 HPLC 色譜柱，成功地在同一系統上進行了多肽純化，得到純度超過 95% 的餾分。高效大孔 Flash 色譜填料提供了堪比制備 HPLC 色譜柱水平的純度，Pure Prep 系統既能夠運行制備 HPLC 也能運行 Flash 色譜模式，您可以自如選擇使用制備 HPLC 或更經濟的一次性 Flash 色譜柱。
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