培養至良好狀態后灌滿培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據,不提供照片默認收到狀態良好。
SV40轉染人成骨細胞HFOB1.19細胞培養步驟
a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養液收集至離心管中,留5ml培養基,放入37℃、5%CO2孵箱培養;如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養。
SV40轉染人成骨細胞HFOB1.19貼壁細胞傳代步驟如下:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基重懸。
4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養基至5-8ml/瓶,最后放入到37℃、5%CO2的細胞培養箱中培養。
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