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杭州實了個驗生物科技有限公司
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賽默飛（Thermo Fisher Scientific）的熒光分光光度計是一種用于測量樣品熒光特性的儀器，常用于分析生物分子、藥物、環境樣品和其他化學物質。以下是其常規操作流程：
一、準備工作
儀器檢查與開機：
確保熒光分光光度計已經正確連接電源和計算機。
打開儀器電源，等待儀器自檢和初始化完成。
打開相應的軟件（通常是Thermo Fisher的控制軟件）進行測量操作。
準備樣品：
樣品的濃度和體積應根據實驗需求進行適當準備。
如果樣品需要稀釋，使用適當的溶劑（如去離子水、緩沖液等）進行稀釋，確保樣品熒光強度在檢測范圍內。
清潔比色皿：
使用無塵擦紙擦拭比色皿，確保其表面無指紋或污漬。
根據需要，選擇合適的比色皿（通常為石英比色皿，適合紫外和可見光區的測量）。
用溶劑沖洗比色皿，避免樣品殘留。
選擇合適的激發和發射波長：
根據實驗需要或文獻參考，確定熒光激發波長和發射波長。
在軟件中設置這些參數以進行測量。
二、操作步驟
1. 樣品與空白測量準備
空白樣品準備：
空白樣品通常是與測量樣品相同的溶劑或緩沖液，用于校準和消除背景干擾。
將空白樣品注入比色皿，放入熒光分光光度計的樣品槽。
測量空白：
在軟件中選擇“空白測量"功能，記錄空白的熒光信號。這一步是為了校正背景信號，確保后續測量的精確性。
測量完成后，取出比色皿，清潔并準備加入實驗樣品。
2. 樣品測量
加入樣品：
將已準備好的樣品注入清潔的比色皿，通常注入量為比色皿容積的2/3左右，避免過滿或過少。
將比色皿放入熒光分光光度計的樣品槽，確保放置穩固。
設置測量參數：
在軟件中設定測量模式，如熒光光譜掃描、時間掃描或定量分析。
設置激發波長和發射波長，確保選擇適合的熒光探針或標記物的波長。
測量：
點擊“開始測量"按鈕，儀器將自動激發樣品并采集熒光發射數據。
數據會在軟件中實時顯示，包括熒光強度值及相應的光譜圖。
3. 數據分析
結果查看：
測量結束后，軟件界面會顯示熒光強度、峰值位置和其他相關數據。
如進行光譜掃描，用戶可以查看整個光譜的發射曲線，找到最大熒光峰值的位置。
數據保存與導出：
軟件通常允許保存測量結果和導出數據，便于后續分析或實驗記錄。
可將數據導出為Excel、PDF或圖形文件，以便進行進一步的分析或報告撰寫。
三、測量完成后的清理與關機
清理比色皿：
使用適當的溶劑或去離子水清洗比色皿，避免樣品殘留污染下次測量。
使用無絨紙或空氣吹干比色皿，確保干燥后存放。
清潔儀器樣品槽：
若不慎將樣品灑入樣品槽，用適當的擦拭紙輕輕清理儀器內部，避免損壞光學系統。
關機與儀器保養：
關閉軟件并保存所有數據。
關閉熒光分光光度計電源，斷開電源插頭以確保安全。
定期進行設備校準和維護，確保儀器的長期準確性和穩定性。
四、常見問題及解決方法
熒光信號過弱或無信號：
樣品濃度過低，考慮適當增加濃度或延長激發時間。
激發波長或發射波長選擇錯誤，確保選用合適的參數。
比色皿清潔不，檢查比色皿表面是否有污漬影響光路。
熒光信號過強或超出范圍：
樣品濃度過高，建議稀釋樣品。
減少激發光強度或降低PMT（光電倍增管）增益以避免飽和。
基線漂移或背景噪音高：
重新測量空白，確保空白溶劑中無熒光物質干擾。
檢查儀器內部光學系統是否清潔，清理樣品槽。
五、總結
賽默飛熒光分光光度計操作簡單、功能強大，是生物化學分析中的工具。通過合理的準備、設置與操作，科研人員可以獲得高質量的熒光測量數據，為各類分子分析和研究提供堅實的基礎。
