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杭州實了個驗生物科技有限公司
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賽默飛ABI 7500實時熒光定量PCR儀是一款高度靈敏的PCR檢測儀器，專為生命科學研究、臨床應用和基因分析設計。它利用先進的熒光檢測技術，實時監測PCR擴增反應過程中的熒光信號變化，從而對目標DNA或RNA的擴增產物進行定量分析。這種技術使得ABI 7500 PCR儀能夠在PCR反應的每個周期中提供精確的定量結果，是科研和診斷實驗室中的重要工具。
一、實時熒光定量PCR的技術原理
1.1 PCR技術的基礎
PCR（聚合酶鏈反應）是一種廣泛應用于分子生物學研究中的基因擴增技術。其基本原理是通過重復的溫度循環過程，將目標DNA片段在體外進行擴增。PCR的三大步驟包括：
變性（Denaturation）：在高溫下（通常為95°C左右），雙鏈DNA解鏈成為單鏈。
退火（Annealing）：溫度降低后（通常為50°C-65°C），特異性引物與目標DNA模板結合。
延伸（Extension）：通過DNA聚合酶催化，從引物開始延伸合成新的DNA鏈。
每個周期都會將目標DNA序列數量加倍，通過重復循環實現指數級擴增。
1.2 實時熒光定量PCR的創新
實時熒光定量PCR（qPCR）技術是在傳統PCR基礎上發展起來的一項重要技術。不同于傳統PCR需要在擴增結束后分析產物，qPCR通過在反應進行過程中監測熒光信號，實時了解DNA擴增情況。ABI 7500 PCR儀通過熒光染料或熒光探針檢測DNA擴增情況，提供更快、更準確的定量分析。
熒光染料法：如SYBR Green染料，它可以與雙鏈DNA結合，隨著DNA量的增加熒光信號增強。
探針法：如TaqMan探針，利用標記了熒光基團的特異性探針結合目標序列，在擴增過程中被降解，釋放熒光信號。
實時監測PCR反應的每個循環，ABI 7500 PCR儀能夠以更高的精度和靈敏度定量目標核酸。
二、賽默飛ABI 7500實時熒光定量PCR儀的核心功能
2.1 精確的熒光檢測系統
ABI 7500 PCR儀配備了高性能的光學檢測系統，能夠實時捕捉PCR反應中的熒光信號。該光學系統采用了多個獨立的激發和發射濾光片通道，確保熒光信號的準確采集和分析。
多通道檢測：支持多種熒光染料和探針，能夠同時進行多重反應檢測，適用于復雜樣品的多靶標分析。
高靈敏度：能夠檢測到低至單拷貝水平的核酸分子，適合檢測微量樣本和低豐度的基因表達。
寬動態范圍：可在多種樣本濃度下提供一致的定量結果，適合從低豐度到高豐度靶標的檢測。
2.2 快速、高效的熱循環系統
ABI 7500 PCR儀的熱循環模塊具有快速升降溫能力，能夠有效縮短每個PCR循環的時間，進而提高實驗效率。這款儀器能夠提供均勻的溫度控制，確保每個反應孔內的溫度一致性，保證實驗結果的準確性和重現性。
溫控精度：ABI 7500的溫控精度可達±0.5°C，確保擴增過程中的精確溫控。
加熱和冷卻速度：能夠以較快的升降溫速度實現快速循環反應，縮短實驗時間。
2.3 用戶友好的軟件界面
ABI 7500配備了直觀且功能強大的數據分析軟件，用戶可以輕松設置實驗參數、實時監測PCR過程并分析結果。該軟件提供了自動化的數據處理功能，極大簡化了復雜實驗的數據分析工作。
實時監測：軟件允許用戶在PCR反應過程中實時查看熒光信號變化，監控擴增曲線。
數據分析：支持標準曲線生成、絕對定量、相對定量、多重分析等多種分析模式。
可視化結果展示：生成圖表和報告，方便用戶快速理解實驗數據。
2.4 多重PCR檢測能力
ABI 7500 PCR儀具有強大的多重檢測能力，能夠在同一反應中檢測多個目標基因。通過多重PCR，研究人員可以在一個反應管內同時分析多個靶標，從而節約時間和成本。
多通道光學系統：允許在單次實驗中檢測多個熒光染料，支持多重定量分析。
減少實驗步驟：能夠在單一反應中完成多靶標檢測，減少實驗步驟，適合高通量實驗。
三、賽默飛ABI 7500 PCR儀的應用領域
3.1 基因表達定量分析
ABI 7500 PCR儀廣泛應用于基因表達定量分析中。通過檢測不同實驗條件下基因的表達水平，研究人員可以深入了解基因調控機制和功能。這種技術在癌癥研究、免疫學研究、藥物開發等領域具有重要應用。
3.2 病原體檢測
實時熒光定量PCR技術在病原體檢測中具有重要的應用價值。ABI 7500 PCR儀能夠快速、靈敏地檢測病原微生物（如病毒、細菌和真菌）的核酸，并為臨床診斷提供關鍵數據。該儀器常用于傳染病監控、食品安全檢測、環境監測等領域。
3.3 SNP和基因突變分析
ABI 7500 PCR儀適用于單核苷酸多態性（SNP）和基因突變分析。通過檢測基因組DNA中的SNP位點或基因突變，研究人員可以分析遺傳變異對生物功能的影響。這種技術在遺傳學研究、基因分型和個體化醫學中應用廣泛。
3.4 miRNA和非編碼RNA研究
miRNA及其他非編碼RNA分子在基因表達調控中發揮著重要作用。ABI 7500 PCR儀能夠高靈敏度檢測這些低豐度的RNA分子，為RNA生物學研究提供了可靠的技術支持。
四、ABI 7500實時PCR實驗的操作流程
4.1 樣品和試劑準備
在開始實驗前，首先需要準備PCR反應混合物，包括DNA樣本、引物、探針（如果需要）以及PCR反應緩沖液。確保樣品質量良好，避免污染是實驗成功的關鍵。
4.2 反應體系設置
將PCR反應混合物加入到96孔PCR板中，每孔的體積通常為20-50 µL。根據實驗設計，確保反應混合物均勻分布。準備完成后，將PCR板放入ABI 7500 PCR儀的熱循環模塊中。
4.3 實驗參數設定
根據實驗需求，在軟件中設定適當的溫度循環程序。通常包括一個初始變性步驟（95°C），接著是若干個擴增循環，每個循環包括變性、退火和延伸三個步驟。此外，還可以設置熒光信號采集的時間點，以便在PCR反應過程中實時監控熒光信號。
4.4 實驗運行與監控
啟動PCR儀，系統將自動執行溫度循環和熒光檢測。在實驗運行過程中，實時熒光信號將在軟件界面中顯示，研究人員可以實時查看擴增曲線，確保反應的順利進行。
4.5 數據分析
實驗結束后，利用ABI 7500配套的數據分析軟件對結果進行分析。軟件會根據熒光信號變化生成擴增曲線和標準曲線，幫助用戶進行定量分析。分析方法包括絕對定量、相對定量、熔解曲線分析等。
五、ABI 7500實時熒光定量PCR儀的技術規格
5.1 光學性能
檢測通道：五通道熒光檢測系統，支持多種熒光染料。
靈敏度：可檢測到單拷貝水平的核酸分子。
動態范圍：高達9個對數動態范圍。
5.2 熱循環性能
溫度范圍：4°C至100°C。
溫控精度：±0.5°C。
升降溫速率：快速升溫降溫，縮短實驗時間。
5.3 數據分析軟件
實時監測：支持實時擴增曲線和熔解曲線監測。
定量分析：提供絕對定量、相對定量和多重分析功能。
數據管理：支持實驗數據的存儲、管理和導出。
六、結論
賽默飛ABI 7500實時熒光定量PCR儀是生命科學研究和臨床應用中工具，憑借其精確的熒光檢測系統、強大的數據分析功能以及快速高效的熱循環能力，該儀器能夠為基因定量、病原體檢測、SNP分析等實驗提供可靠支持。它廣泛應用于分子生物學、遺傳學、臨床診斷等多個領域，為科研人員提供了強有力的技術平臺。
