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杭州實了個驗生物科技有限公司
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瀏覽次數賽默飛酶標儀檢測準確度的方法與流程分析
一、引言
酶標儀（Microplate Reader）是實驗室中常用的光學分析設備，廣泛應用于生命科學、醫學診斷、生物制藥等領域。賽默飛（Thermo Fisher Scientific）生產的酶標儀型號較多，具備吸光度、熒光、發光等多種檢測模式。為了保證實驗數據的可靠性，對酶標儀進行準確度檢測具有重要意義。準確度的高低直接關系到實驗結果的真實性和可重復性，因此，掌握準確度檢測的方法和流程尤為重要。
本文將結合實際操作與相關技術標準，系統介紹賽默飛酶標儀的準確度檢測方法，包括檢測原理、使用標準物質、操作步驟、數據處理方式以及常見問題與解決策略。
二、準確度的定義與意義
準確度（Accuracy）是指儀器測量值與參考標準值之間的一致程度。在酶標儀中，準確度通常以測得的吸光度（OD值）與標準吸光度之間的偏差來表示。準確度不僅影響實驗結果的真實性，還會對臨床診斷、藥物篩選等應用產生潛在影響。
在ISO 9001、GLP（良好實驗室規范）等質量管理體系中，儀器的準確度檢測是例行質量控制的一部分。此外，FDA及中國國家藥監局（NMPA）也對分析儀器的準確度驗證提出了明確要求。
三、檢測原理與方法概述
酶標儀的準確度檢測主要基于以下原理：
比色法光吸收定律：即朗伯-比爾定律（A = εcl），在特定波長下，吸光度與物質濃度成正比；
使用已知吸光度的標準溶液或標準濾光片：對儀器進行測量；
比較測得值與標準值的偏差，計算誤差范圍是否在允許限度內。
3.1 常用檢測方式：
使用認證濾光片（如NIST認證）進行光通道準確度測試；
使用商業標準染料溶液（如鈷氯化物、鉀二鉻酸鹽）進行吸光度準確度驗證；
進行線性梯度稀釋，制作標準曲線來間接驗證準確度。
四、標準物質的準備
4.1 濾光片法
選用認證的中性密度濾光片，其在特定波長下具有已知的透過率，適合快速檢測儀器的光通道響應是否準確。適用于單通道或多通道酶標儀。
4.2 溶液法
配制吸光度穩定的溶液，要求：
溶液應在檢測波長下具有較穩定的吸光特性；
濃度梯度設置合理（例如OD值在0.1 ~ 2.5之間）；
使用緩沖液、玻璃比色皿或標準96孔板進行分裝。
常用標準溶液包括：
鉀二鉻酸鹽（波長為405 nm、450 nm）
鈷氯化物（570 nm）
亞甲藍、硫堇、碘化鉀等染料
五、檢測流程詳解
5.1 檢測準備
儀器預熱30分鐘，確保光源穩定；
清潔酶標儀光路與樣品架；
準備標準溶液或濾光片，按操作說明進行配置；
使用空白孔設置基線。
5.2 操作步驟
校準波長：選定常用檢測波長（如405、450、492、620 nm等）；
插入標準物質：將濾光片或標準液體分別加入孔位；
讀取吸光度：進行測量，記錄每個孔的OD值；
重復測試：每項檢測建議重復3~5次，確保穩定性；
對照參考值：與標準物質提供的理論吸光度進行比對；
計算偏差：使用以下公式：
偏差（%）= |測量值 - 標準值| / 標準值 × 100%
5.3 數據記錄與判斷標準
常見判定依據：
偏差≤±5%：通常認為準確；
偏差>±10%：需進一步檢查儀器光源或校準狀態；
多通道儀器要求通道間一致性偏差≤±3%。
六、誤差來源分析
6.1 儀器自身因素
光源老化，輸出不穩定；
濾光片或光柵污染；
檢測通道位置不一致；
檢測器靈敏度衰退。
6.2 操作因素
標準物質濃度配置不準確；
微孔板的質量不均或有劃痕；
溶液加樣體積不一致；
溫度影響液體的吸光度。
七、維護建議與周期檢測
7.1 定期校準
建議每6個月對酶標儀進行一次準確度驗證，對于高頻使用的設備，可按季度安排。
7.2 維護記錄
建立設備運行日志，包括每次準確度檢測結果、維護時間、維修記錄等，便于追蹤。
7.3 軟件輔助分析
部分賽默飛酶標儀配套的軟件（如SkanIt、Multiskan軟件）可自動對檢測數據進行統計分析，提高準確度判斷的效率與客觀性。
八、常見問題與處理策略
| 問題 | 原因 | 處理措施 |
|---|---|---|
| 讀數偏低 | 燈源老化，樣品渾濁 | 更換燈源，過濾樣品 |
| 通道間誤差大 | 光路污染，不同孔板反光差異 | 清潔光學系統，更換微孔板 |
| 檢測波長漂移 | 濾光片或光柵老化 | 更換光學元件，重校波長 |
| 讀數不穩定 | 電源波動，環境溫度變化大 | 使用穩壓電源，恒溫檢測環境 |
九、結語
酶標儀的準確度驗證是保證實驗質量的關鍵環節。通過科學的方法和標準化的操作流程，可以有效評估賽默飛酶標儀的性能狀態，及時發現潛在問題并加以調整。建議實驗室建立系統的儀器校準與驗證制度，將準確度檢測作為儀器日常管理的一部分，提升實驗數據的可靠性。
