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            除了濃度,還有哪些因素會影響核酸電泳的結果?

            2025-4-23  閱讀(265)

            分享:
            除了凝膠濃度,以下因素也會對核酸電泳結果產生影響:


            • 核酸樣品的質量和純度

              • 完整性:核酸樣品若存在降解,會導致電泳條帶呈現彌散狀或出現多條不清晰的條帶,影響對核酸分子量大小和濃度的準確判斷。

              • 純度:樣品中若含有蛋白質、多糖、酚類等雜質,可能會與核酸結合,影響核酸在凝膠中的遷移率,導致條帶變形、拖尾或遷移速度異常。

            • 電泳緩沖液

              • 種類:不同的緩沖液具有不同的 pH 值和離子強度,會影響核酸的帶電性質和遷移速度。例如,常用的 TAE 緩沖液(Tris - 乙酸 - EDTA)和 TBE 緩沖液(Tris - 硼酸 - EDTA),TBE 的緩沖能力較強,適合長時間電泳,但高濃度的 TBE 會影響 DNA 的遷移率,而 TAE 則更適合用于大片段 DNA 的電泳。

              • 濃度:緩沖液濃度過高,會使凝膠的電阻增大,產熱增加,導致核酸分子的遷移速度減慢,甚至可能使 DNA 條帶扭曲變形;濃度過低,緩沖能力不足,會使電泳過程中 pH 值發生變化,影響核酸的遷移。

              • 使用次數:多次使用的緩沖液中離子濃度會發生變化,且可能積累了電泳過程中產生的雜質,如核酸降解產物等,從而影響電泳效果,一般建議及時更換緩沖液。

            • 電場強度

              • 電場強度過大,會使核酸分子遷移速度過快,導致分辨率降低,尤其對于較大分子量的核酸,可能會使其在凝膠中的遷移行為異常,無法準確分離;電場強度過小,電泳時間會延長,核酸分子可能會發生擴散,同樣影響分辨率。一般來說,在進行常規瓊脂糖凝膠電泳時,電場強度通常控制在 5 - 10 V/cm。

            • 凝膠的制備和保存

              • 制備過程:凝膠制備過程中若攪拌不均勻、加熱不充分或冷卻速度過快等,都可能導致凝膠的孔徑大小不均勻,影響核酸分子的遷移路徑,使條帶不整齊或出現扭曲現象。

              • 保存條件:制備好的凝膠若保存不當,如在干燥環境中放置時間過長,會導致凝膠失水干裂;若保存溫度過低或過高,也會影響凝膠的性能,一般建議將凝膠保存在 4℃左右的濕潤環境中,并盡快使用。

            • 染色和成像

              • 染色劑:選擇合適的染色劑對于清晰觀察核酸條帶至關重要。常用的染色劑如溴化乙錠(EB),其與核酸結合的量會影響條帶的熒光強度,如果染色時間過長或染色劑濃度過高,可能會導致背景熒光增強,影響條帶的清晰度;而染色時間過短或濃度過低,則條帶熒光較弱,不易觀察。此外,不同染色劑對不同類型核酸的親和力也有所差異,例如 SYBR Green 對雙鏈 DNA 和 RNA 都有較好的染色效果,而對單鏈 DNA 的染色效果相對較弱。

              • 成像設備:成像設備的靈敏度、分辨率以及曝光時間等參數設置也會影響核酸電泳結果的呈現。如果曝光時間過長,條帶會過亮且可能出現拖尾現象;曝光時間過短,條帶則可能顯示不出來。


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