一、試劑盒概述

Annexin V-AbFluor™ 647 細胞凋亡/周期檢測試劑盒是一種用于高靈敏度檢測細胞凋亡和細胞周期的試劑盒。它通過 Annexin V 與磷脂酰絲氨酸（PS）的特異性結(jié)合，結(jié)合碘化丙啶（PI）雙染技術(shù)，實現(xiàn)凋亡早晚期細胞及死細胞的精準區(qū)分，適用于流式細胞術(shù)與熒光顯微鏡檢測。

二、工作原理

• 細胞凋亡過程中的 PS 外翻：在正常細胞中，PS 位于細胞膜內(nèi)側(cè)，細胞凋亡時，PS 會從細胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè)，暴露于細胞外環(huán)境。

• Annexin V 與 PS 結(jié)合：Annexin V 是一種依賴 Ca2?的磷脂結(jié)合蛋白，對 PS 具有高親和力。當細胞發(fā)生凋亡，PS 外翻至細胞膜外側(cè)時，Annexin V 可與其結(jié)合，從而識別凋亡細胞。

• PI 的染色作用：PI 是一種熒光核染料，不能穿透活細胞和早期凋亡細胞的完整細胞膜，但能透過晚期凋亡和壞死細胞的細胞膜，使細胞核染色。通過 Annexin V 和 PI 的聯(lián)合染色，可以區(qū)分活細胞、早期凋亡細胞和晚期凋亡或壞死細胞。

三、試劑盒組分及作用

• Annexin V 結(jié)合緩沖液（5×）：用于稀釋和重懸細胞，為 Annexin V 與 PS 的結(jié)合提供適宜的環(huán)境，包括適當?shù)碾x子強度和 pH 值等，其成分和配比能穩(wěn)定細胞狀態(tài)，減少非特異性結(jié)合。

• Annexin V-AbFluor™ 647：是 Annexin V 與 AbFluor™ 647 熒光染料的標記物。AbFluor™ 647 染料具有優(yōu)異的熒光性能，其激發(fā)波長為 650nm，發(fā)射波長為 665nm，相比其他類似染料，如 Alexa Fluor 647、Cy5、DyLight™ 649 等，具有更高的熒光強度和光穩(wěn)定性，能更清晰地標記凋亡細胞。

• 碘化丙啶（PI）：PI 的激發(fā)波長為 535nm，發(fā)射波長為 617nm。活細胞和早期凋亡細胞由于細胞膜完整，PI 無法進入細胞內(nèi)，因此細胞核不被染色；而晚期凋亡和壞死細胞的細胞膜失去完整性，PI 可進入細胞與 DNA 結(jié)合，使細胞核發(fā)出紅色熒光。

四、檢測方法及優(yōu)勢

• 流式細胞術(shù)：可快速定量分析大量細胞的凋亡情況。通過設(shè)置不同對照樣品，如陰性對照細胞（不加染料）、單染 Annexin V-AbFluor™ 647 細胞、單染 PI 細胞，調(diào)整電壓和光補償后，能準確區(qū)分四類細胞：活細胞（Annexin V-/PI-）、早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡細胞（Annexin V+/PI+）和壞死細胞（Annexin V-/PI+）。

• 熒光顯微鏡檢測：適用于觀察細胞的形態(tài)學(xué)變化和單個細胞的凋亡情況。對于懸浮細胞，可按照流式細胞術(shù)步驟操作后，將細胞懸液置于玻片上進行觀察；對于貼壁細胞，可在蓋玻片或培養(yǎng)室中培養(yǎng)和誘導(dǎo)凋亡后，加入工作液孵育，再進行觀察。

Annexin V-AbFluor™ 647 細胞凋亡/周期檢測試劑盒具有以下優(yōu)勢：

• 高靈敏度和特異性：能精確區(qū)分不同階段的凋亡細胞和死細胞，對早期凋亡細胞的檢測具有很高的靈敏度。

• 雙通道檢測：Annexin V-AbFluor™ 647 和 PI 的熒光發(fā)射波長不同，可實現(xiàn)雙通道檢測，提供更全面的細胞凋亡信息。

• 良好的兼容性：適配主流流式細胞儀及熒光顯微鏡平臺，方便不同實驗室根據(jù)現(xiàn)有設(shè)備選擇使用。