溶劑極性
介紹吸附薄層色譜前，應熟知常用溶劑極性順序表，便于更好地應用薄層色譜。常用溶劑極性順序為：石油醚<環己烷<四氯化碳<三氯乙烯<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<丙酮<正丁醇<乙醇<甲醇<水<乙酸。此外，常見化合物極性順序為：烷烴<烯烴<醚<硝基化合物<二甲胺<酯類<酮類<醛類<硫醇<胺類<酰胺類<醇類<酚類<羧酸類。
展開劑選擇
展開劑的極性越強，其洗脫能力越強，化合物的Rf值越大；反正展開劑極性越小，洗脫能力弱，相應化合物的Rf值越小，一般要求選取合適的展開劑系統使化合物的Rf值控制在0.2-0.8以內。展開劑選擇可以用點滴實驗法，將要被分離的物質溶液點在薄層板上，揮干，用毛細管分別吸滿不同展開劑點到樣品點的中心，借毛細管作用，展開劑從圓心向外擴展，出現不同的圓心色譜，選取zui合適的展開劑。如下圖，苯為zui合適的展開劑。
為了提高分離效果，經常需要采用混合溶劑組成流動相，調整比例及更換展開劑組成來調整流動相的極性、互溶性、酸堿性和黏度，達到*的分離目的。混合展開劑中，弱極性溶劑系統一般由石油醚、苯、環己烷等組成，然后選擇性加入乙酸乙酯、甲醇、乙醇等；中等極性溶劑系統一般由三氯甲烷和水組成，用乙酸乙酯、甲醇、乙醇來調節，適合于蒽醌類或皂苷類成分分離；大極性溶劑系統一般由正丁醇和水組成，用乙酸乙酯、甲醇、乙醇來調，適合于極性較大的有機堿類化合物的分離。
薄層板的類別
常見的薄層板型號及代表含義如下表：
點樣
點樣形狀一般為圓形點，點樣基線距底邊1.0-1.5cm，點樣直徑為2-3mm，板原點直徑約為1mm，盡量避免多次點樣。點間距離根據斑點擴散情況而定，一般薄層為1-2cm，薄層為0.5cm。用手工點樣時，應該注意勿損失薄層表明，忌用嘴吹薄層板。
展開
點樣后的薄層板，置于密閉的層析缸中展開。展開劑浸入薄層板下端高度不超過0.5cm，保證點樣處不接觸展開劑。
對于某些復雜或難分離的成分，可采用雙向展開法或者二次展開法，雙向展開即在方形的薄層板的相鄰兩邊分別劃一條直線，相交于一點為原點，將樣品溶液點于此點上，先用一種展開劑沿著一個方向展開，吹干展開劑，調轉薄層板，再用另一種展開劑進行第二次展開，對復雜難分離的樣品有較好的分離效果，如圖。
此外，展開后的板可能會出現邊緣效應。邊緣效應是指點于同一薄層的同一物質，展開后薄層板邊緣處斑點的Rf值與板中間的斑點Rf值有所不同，呈現凹形，如下圖。
邊緣效應多出現在混合溶劑展開劑系統中，如果薄層板較大，展開時間長，展開劑揮發的速度不同，上行展開時，由于被吸附劑吸附較弱的弱極性或易揮發的溶劑，在薄層板邊緣易揮發，使薄層板邊緣部分溶劑極性比中間大，邊緣斑點的Rf值大于中間區域的；另一方面，薄層板背面蒸氣稀薄，導致板邊緣處蒸氣向背面移動，致使邊緣處蒸發掉的溶劑由溶劑貯存器得到補充，板邊緣與中心相比，有更多的展開劑沿邊緣移動，因此邊緣的斑點Rf值高于中間區域。
為了減少邊緣效應，可采取以下辦法：
使用雙槽的層析缸，一槽中放薄層板，另一槽加入展開劑待溶劑蒸氣達到飽和后再展開；
在層析缸內壁貼上浸濕展開劑的濾紙條；
使用預制板；
使用較小體積的合適的層析缸；
將斑點盡量點在靠中間區域；
采用狹薄層板代替寬薄層板；
選擇適宜的單一展開劑代替混合展開劑；
采用共沸溶劑代替一般混合溶劑。
斑點的檢識
色譜斑點的檢識包括光學檢出法和試劑顯色法。
光學檢出法分三種情況：
化合物本身有色，在日光下可直接觀察；
化合物在可見光下沒有顏色，但可吸收紫外光并發射更長波長的光而呈現不同顏色的熒光斑點；
在可見紫外光下都不顯色，也沒有合適顯色方法的，可以用熒光薄層板，化合物在紫外燈下可在熒光背景下顯示暗斑。這是因為這些化合物減弱了吸附劑中熒光物質的紫外吸收強度，引起熒光猝滅。
試劑顯色法包括以下三種：
噴霧顯色，將顯色劑噴灑于薄層板（硬板）上，根據顯色原理不同，可直接顯色或加熱顯色。
浸漬顯色。
蒸氣顯色：如碘蒸氣，揮發性的酸、堿，如鹽酸、硝酸、濃氨水、乙二胺等。
異常斑點的對策
7.1 拖尾
拖尾在薄層中較常見。引起拖尾的原因有以下幾點：1.點樣過量，由于吸附劑負載樣品能力有限，超載的樣品被拋在后面，形成拖尾。2.重復點樣，重復點樣時每次中心未重合，使點樣點呈橢圓形，形成拖尾。3.硅膠死吸附大的化合物亦易形成拖尾，如多羥基化合物，有機酸，糖苷等。根據上述原因，濃的樣品可以稀釋之后再點樣；重復點樣樣品控制手不發抖或者每次點樣都控制點在同一位置；加入酸堿等改良劑來減少拖尾現象。
7.2 念珠狀斑點
由于化合物斑點之間距離小，相互連接呈念珠狀。引起原因有：1.樣品成分復雜過多，在短的薄層板上達不到分離效果，彼此重疊。2.重復點樣時，中心不重合，形成復斑。采取措施：適當增加薄層板的長度或采用二次雙向展開；重復點樣時，每次點樣中心應重合。
7.3 Rf值不穩定
重復操作時同一樣品Rf值不穩定，時高時低。如下情況導致此現象：1.層析穩定不穩定，特別是使用混合展開系統時，溫度不穩定導致展開劑比例變化；2.人為操作不當，吸取或加入展開劑時不迅速，或加入展開劑時未及時將層析缸蓋上密封；3.薄層板厚薄不均勻；4.溶劑質量不同。對策：如果用電吹風吹干層析缸時一定待層析缸冷卻至室溫再展開；養成正確的實驗操作習慣；選取厚薄均一的薄層板；選擇質量好的溶劑。
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