色譜泵是指采用色譜技術(shù)制備純物質(zhì)，即，分離、收集一種或多種色譜純物質(zhì)。制備色譜中的“制備”這一概念指獲得足夠量的單一化合物，以滿足研究和其它用途。制備色譜的出現(xiàn)，使色譜技術(shù)與經(jīng)濟利益建立了聯(lián)系。制備量大小和成本高低是制備色譜的兩個重要指標(biāo)。其中，色譜泵主要用于石油化工產(chǎn)品和揮發(fā)性天然產(chǎn)物的色譜純樣品制備。

 

　　色譜泵到底是什么？

 

　　（1）分析色譜的目的：

 

　　分析出混合物中一（或者，幾個）純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì)。為了加快分離的時間與提高分離的效率，制備色譜的的進樣品量很大，導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負荷的相應(yīng)加大，也就必須加譜柱填料，增大制備色譜的直徑和長度，使用的相對多的流動相。然而，當(dāng)色譜柱上樣品負載加大的時候，往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜，要解決容量與柱子效果之間的矛盾，對重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟上來說。制備色譜要爭取少用填料，少用溶劑，要盡可能多的得到產(chǎn)品。

 

　　（2）樣品的前處理

 

　　制備色譜柱子由于處理的樣品多，比分析柱子容易受污染，所以，必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結(jié)晶、固相萃取等簡單的分離方法，如果用得上，而且還不是很麻煩，就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。

 

　　（3）制備色譜柱的材質(zhì)及其特點

 

　　下面介紹一下，色譜泵常用的材質(zhì)及其特點：

 

　　各種規(guī)格的玻璃柱子在實驗室里頭很容易得到，而且價格低廉，但玻璃柱子致命的弱點是它能承受的壓力很小，且非常容易破碎。當(dāng)由于壓力太小而導(dǎo)致流動相流速很慢的時候，高位液面或加高壓空氣（或氮氣）的采用是一個簡單的解決辦法。在底下加真空，也能在一定程度上解決個問題。

 

　　不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能，但其價格相對很貴。如果，只有很小的分離任務(wù)且經(jīng)費也允許，市面上直徑為1cm的小型制備柱。

 

　　有機玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕，相對不銹鋼柱子而言，它是半透明的，可以看到液體的運行狀態(tài)，對有色的物質(zhì)其特點就更為突出。

 

　　（4）固定相的選擇

 

　　硅膠、鍵合固定相（如，C18）、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻報道，對填料可以進行一下處理提高了分離效果，如，對硅膠進行的硝酸銀（或緩沖液）處理。

 

　　各種類型的色譜泵有不同的操作方法。可以參照各自的操作手冊。現(xiàn)簡要介紹如下：

 

　　1、準備好工具和所需部件。工具包括扳手、10#木螺釘、超聲清洗粉、墊圈安裝工具、新墊圈。用水-甲醇沖洗泵，拆開進出口管道，在泵頭和單向閥上標(biāo)出液流方向。

 

　　2、將柱塞桿縮至zui小，松開色譜泵泵頭的兩根收緊螺絲，小心托住泵頭。操作時要注意處處以平衡的動作慢慢退出泵頭，切不可搖動或上下左右擺動泵頭，否則柱塞桿極易折斷。退出泵頭后，柱塞桿還留在泵上。

 

　　3、用10#的木螺釘旋進就螺釘孔中輕輕撥出舊墊圈，注意不要劃破泵頭。要毫不猶豫的扔掉舊的墊圈。

 

　　4、將色譜泵泵頭和新墊圈分別放入甲醇中超聲清洗，同時用無纖維紙擦洗柱塞桿。查看柱塞桿上有無劃痕，如有劃痕則應(yīng)先更換新的柱塞桿在換新的墊圈。

 

　　5、安上新墊圈。這一步要用專門的安裝工具，切不可粗心大意，避免損壞墊圈。有寫公司專門出售安墊圈的工具，有詳細的說明與圖解。選一根略粗于柱塞桿的不銹鋼桿，截成約5厘米長，一端精密磨制成與柱塞桿同粗細的、有很高光潔度的面。選一根直徑大于柱塞桿約2mm、壁厚2 mm，長約3cm，一端截面平整光滑的銅管，操作時將不銹鋼桿光滑端從墊圈無彈簧的一側(cè)輕輕插入，插至墊圈不掉下來即可。將墊圈有彈簧的一側(cè)對準泵室，再給不銹鋼桿套上銅管，用光滑的一面輕輕向泵室壓墊圈，同時抽出不銹鋼桿，繼續(xù)用拇指將墊圈壓入泵頭，加上墊圈。

 

　　6、重新裝上色譜泵泵頭。先在柱塞桿上滴幾滴甲醇以濕潤，滑動泵頭到位。千萬不能搖動或擺動，以防止柱塞桿在這一步操作時折斷。平衡地上緊固定螺絲，接上進液管道。

 

　　7、zui后，打脫氣的甲醇到泵腔中，不斷用紙巾從泵出口處吸去流動液，等無氣泡溢出時再接上輸出管道，打開泄液閥，繼續(xù)抽20ml甲醇趕走氣泡后，換成需要的流動相。

 

　　如果泵被微粒污染，可分別用 25ml 水＋25ml 甲醇＋25ml異丙醇＋25ml 二氯甲烷依次沖洗，再用所用的溶液沖洗整個系統(tǒng)。注意：沖洗時應(yīng)打開泄液閥。如果氣泡進入閥中，色譜泵會緊貼在閥體的一側(cè)，使寶石球難返回到閥座，引起液體倒流，導(dǎo)致泵的壓力和流速明顯改變。此時應(yīng)立即打開瀉液閥，大流量（2ml/min）沖洗泵，直至排除液為直線型。如果泵進氣泡也可在泵頭上排氣泡，具體做法為：用扳手固定住進氣泡的泵頭，擰開輸出管道的壓帽，手動泵進液，這時可見到氣泡從孔中擠壓出來，直至無氣泡排出將壓帽擰緊。如果采取上述方法仍不能使壓力穩(wěn)定， 應(yīng)考慮是密封墊圈壞了或單向閥磨損、球不光滑等，需更換部件。

 

　　色譜泵泵墊圈故障

 

　　色譜泵泵墊圈常見的故障是滲漏和墊圈受損污染系統(tǒng)。 液相色譜系統(tǒng)一般情況下不要使用強酸強堿溶液，樣品 PH 值一般調(diào)到中性，才可進樣。如果強酸強堿會損壞密封墊和柱塞桿。密封圈與運動著的柱塞桿緊密接觸，可使柱塞在泵頭自由運動而流動相不漏出來，色譜泵是液相色譜中易磨損的部件。有條件的實驗室可三個月更換一次墊圈， 以防止泵系統(tǒng)污染。如果用緩沖鹽作流動相則更會加速墊圈的磨損，應(yīng)及時沖洗。墊圈損壞一般表現(xiàn)為：泵壓力不穩(wěn)、泵頭漏液。為避免上述故障的發(fā)生，我們在分析中應(yīng)注意以下幾點

 

　　1、使用超純水、純度級別較高的試劑和色譜級溶劑配制流動相；

 

　　2、配好的流動相一定要抽濾脫氣，即便儀器有在線脫氣裝置，也在上機前進行抽濾；

 

　　3、色譜泵在啟動前一定要通過泄液閥抽凈泵里的空氣；

 

　　4、用緩沖鹽洗脫時，分析結(jié)束后一定要用水沖洗泵和整個流路系統(tǒng)，用有機溶劑充滿系統(tǒng)。