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            天津市蘭博實驗儀器設備有限公司

            HPLC法測定黃蜀葵花中金絲桃苷的含量

            時間:2015-7-10 閱讀:702
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                黃蜀葵花為錦葵科植物黃蜀葵(Abelmoschus manihot (L. ) Medic)的干燥花冠,具有通淋、消腫、解毒等功效,多用來治療淋病、癰疽腫毒、燙傷等。有研究指出黃蜀葵花的主要成分為黃酮類化合物,其中以金絲桃苷、槲皮素,異槲皮素含量zui高。本文利用天津蘭博*代理的美國蘭博液相色譜儀建立了測定黃蜀葵花中金絲桃苷的含量的HPLC法,結果表明方法簡單準確,結果可靠。


            1.1 儀器

            分析型液相色譜儀(HPLC),由AS3000自動進樣器,Laballiance Series 高壓泵、DAD檢測器和Lablliance色譜工作站組成,配一支C18 Kromasil 色譜柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)AXM-8 Temp.柱溫箱。

            1.2試劑和樣品

            金絲桃苷對照品品(中國藥品生物制品檢定所),乙腈(色譜純),水為屈臣氏蒸餾水,其他試劑為分析純,黃蜀葵花樣品購自當地藥店,產地為安徽。

            1.3對照品溶液配制

            精密稱取金絲桃苷對照品5.00 mg,加甲醇定容至25 mL,制成0.200 g/L的金絲桃苷對照品儲備液,冷藏備用。

            1.4供試品溶液的制備

            精密稱取樣品粉末200 mg70%甲醇溶解,超聲30 min,過濾液置于50mL容量瓶中,加70%甲醇定容至刻度,冷藏備用。

            1.5色譜條件:

            色譜柱:Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um);

            流動相:乙腈-0.5%磷酸水溶液(v/v=20:80

            柱溫:40

            流速:1.0 mL/min

            檢測波長:360 nm

            進樣量:20 uL。

            2測試結果

            2.1檢測波長的選擇

            取金絲桃苷對照品溶液和樣品溶液,分別進行紫外光譜掃描,金絲桃苷在258nm和360nm有兩個zui大吸收峰,兼顧樣品和對照品,所以我們選用測定波長為360nm。

             

            金絲桃苷對照品的液相色譜圖

            2.2線性關系、方法檢出限考察

            分別移取金絲桃苷對照品儲備液0.5、1、2、3、4 mL,分別用甲醇定容至10 mL,配制得到一系列對照品溶液。取上述溶液20 uL,按1.5所述色譜條件進樣分析。以峰面積Y為縱坐標,進樣量Xug)為橫坐標,繪制標準曲線,得線性方程。金絲桃苷的線性回歸方程為Y = 209253 X +9531.5,r = 0.9998,線性范圍為216 ug以3倍信噪比計算該方法的zui低檢測限為30 ng.

            2.3精密度和重現性實驗

            取供試品溶液重復進樣6次,每次20 uL,測定峰面積。金絲桃苷峰面積測定結果的RSD1.34%,表明方法精密度良好 。

            取樣品,按1.4條件制備6份供試品溶液,分別進樣20 uL,測定峰面積,計算金絲桃苷的含量,含量測定結果的 RSD1.03%表明方法重性良好。

            2.4穩定性實驗

            取樣品溶液分別在0、2、4、8、121.5的色譜條件進樣,(不測時于冰箱4冷藏),測定峰面積,峰面積的RSD分別為1.86%結果表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

            2.5加標回收率實驗

            精密稱取已知金絲桃苷含量的黃蜀葵花樣品,分別加入不同含量的金絲桃苷對照品,按1.4項下方法制備供試品溶液,測定量,計算回收率結果如表1。


            表1 加標回收試驗結果

            已知含量/mg

            添加量/mg

            測得值/mg

            回收率/%

            平均回收率/%

            RSD/%

            1.18

            1.03

            2.13

            92.2

            93.8

            1.6

            1.24

            1.01

            2.19

            95.2

            1.16

            1.01

            2.10

            94.0

            1.18

            1.20

            2.31

            94.2

            95.6

            1.33

            1.20

            1.23

            2.39

            96.7

            1.19

            1.21

            2.35

            95.9

            1.21

            1.50

            2.65

            96.0

            97.1

            1.04

            1.23

            1.46

            2.65

            97.3

            1.22

            1.49

            2.68

            98.0

            3結論

            黃蜀葵花的主要化學成分是黃酮類,其中金絲桃苷,含量較高,活性較強,且性質穩定,所以選擇測定金絲桃苷的含量做為質量控制的指標。本文采用液相色譜法測定黃蜀葵花中金絲桃苷的含量,經過精密度、回收率等驗考查,均符合要求。該方法靈敏,快速,準確,可用于對黃蜀葵花的質量進行評價。


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