引言 對(duì)羥基苯甲酸酯指的是一 組對(duì)羥基苯甲酸酯化合物， 這類化合物廣泛用做多種 日常產(chǎn)品的抗菌防腐劑，如 化妝品、個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品、食品和藥物制劑 1-5。它們因具有廣譜活性，以及化學(xué) 和熱穩(wěn)定性 1-3，因此被廣泛使用。對(duì)羥基苯甲酸酯可以單獨(dú)使用，也可以與其 他對(duì)羥基苯甲酸酯組合使用 1。近期研究發(fā)現(xiàn)，部分對(duì)羥基苯甲酸酯表現(xiàn)出微 弱的內(nèi)分泌干擾作用，可增加罹患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)還存在其他影響。由于 對(duì)羥基苯甲酸酯能夠被皮膚吸收而不被酯酶分解，這些影響可能會(huì)進(jìn)一步被加 劇 1,2,4,5。

由于這些潛在的健康風(fēng)險(xiǎn)，歐洲國家已經(jīng)限制在化妝品和個(gè) 人護(hù)理產(chǎn)品的生產(chǎn)中使用對(duì)羥基苯甲酸酯。歐盟委員會(huì)條例 已經(jīng)禁止使用幾種對(duì)羥基苯甲酸酯，包括對(duì)羥基苯甲酸異丙 酯、對(duì)羥基苯甲酸異丁酯、對(duì)羥基苯甲酸苯酯、對(duì)羥基苯甲 酸芐酯和對(duì)羥基苯甲酸戊酯，并針對(duì)其他對(duì)羥基苯甲酸酯制 定了限制措施 6。對(duì)羥基苯甲酸酯，屬于“4-羥基苯甲酸及其鹽和酯"的范疇。 根據(jù)這一規(guī)定，單一酯類的最大濃度為 0.4 %（w/w），酯混 合物的最大濃度為 0.8 %（w/w）6。對(duì)羥基苯甲酸丁酯和對(duì) 羥基苯甲酸丙酯被視為對(duì)消費(fèi)者而言較為安全，只要其在化 妝品制成品中的各自濃度加和不超過 0.14 %（w/w）即可 6。 2-苯氧乙醇是另一種具有廣譜抗菌活性的防腐劑，廣泛被用 于化妝品和個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品 7。2-苯氧乙醇可以單獨(dú)使用，也可 以與對(duì)羥基苯甲酸酯結(jié)合使用。歐洲消費(fèi)者安全科學(xué)委員會(huì) 認(rèn)為，當(dāng) 2-苯氧乙醇的濃度不超過 1.0 %（w/w）時(shí)，對(duì)消費(fèi) 者（包括兒童）是安全的 7,8。

在美國，雖然《聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法》（FD&C 法）對(duì) 化妝品中的防腐劑沒有具體規(guī)定，但對(duì)其處理方式與其他化 妝品成分相同，即銷售摻假或標(biāo)錯(cuò)的化妝品屬于違法行為 9。 如果按照標(biāo)簽上的說明正確使用化妝品，那該化妝品對(duì)消費(fèi) 者必須是安全的。

對(duì)于生產(chǎn)含有對(duì)羥基苯甲酸酯的化妝品制造商而言，開發(fā) 穩(wěn)健的分析方法以確保產(chǎn)品質(zhì)量的一致性使其持續(xù)符合法 規(guī)及安全要求是極其重要的。本文展示了一種快速、穩(wěn)妥且高靈敏的液相色譜方法，用于對(duì)八種不同市售化妝品和個(gè) 人護(hù)理產(chǎn)品中的 2-苯氧乙醇和七種常用的對(duì)羥基苯甲酸酯 進(jìn)行分析。這八種防腐劑的結(jié)構(gòu)如圖 1 所示。

實(shí)驗(yàn)部分 硬件/軟件 使用珀金埃爾默 LC 300 HPLC 系統(tǒng)進(jìn)行色譜分離，該系統(tǒng) 由 LC 300 HPLC 泵和配有集成柱溫箱的 LC 300 HPLC 自 動(dòng)進(jìn)樣器組成。通過 LC 300 多波長紫外/可見光檢測器 （MWD）進(jìn)行檢測。儀器控制、檢測分析和數(shù)據(jù)處理由 SimplicityChrom™ CDS 軟件平臺(tái)完成。

色譜圖前半部分使用波長程序在 220 nm 下進(jìn)行檢測，以 達(dá)到對(duì) 2-苯氧乙醇的最佳靈敏度，然后在 1.516 分鐘時(shí) 切換至 254 nm 作為剩余色譜分析的檢測波長。

溶劑、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品 所有使用的溶劑和稀釋劑均為 HPLC 級(jí)。除非另有規(guī)定， 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品提取液則均采用甲醇進(jìn)行稀釋配制。 八個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品購自 Sigma-Aldrich®, Inc. （St. Louis, MO）。 這些標(biāo)準(zhǔn)品包括：2-苯氧乙醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸異丙酯、 對(duì)羥基苯甲酸丁酯、對(duì)羥基苯甲酸異丁酯和對(duì)羥基苯甲酸 芐酯。 將每種標(biāo)準(zhǔn)品分別稱取 10 mg 溶解在 20 mL 甲醇中，分 別制備 500 μg/mL 的單獨(dú)化合物標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。然后在 10 mL 容量瓶中加入 1 mL 每種標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，制備 50  μg/mL 工作液，這也作為等級(jí) 10 的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品。選擇甲 醇作為稀釋劑以確保標(biāo)準(zhǔn)品溶解。 通過使用甲醇將工作溶液連續(xù)稀釋至 25、12.5、5、2.5、 1.25、0.5、0.25、0.125 和 0.0625 μg/mL 的濃度水平來制 備其余的校準(zhǔn)標(biāo)樣，以獲得 10 個(gè)濃度級(jí)別的校準(zhǔn)標(biāo)樣。從當(dāng)?shù)爻匈徺I八款不同的個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品，包括保濕霜、爽膚 水、護(hù)手霜、面部保濕乳液、身體乳、沐浴露、標(biāo)有不含防腐 劑的胡須清潔液和標(biāo)有不含防腐劑的面霜。 對(duì)約 0.1 g 的每個(gè)樣品在 50mL 容量瓶中用甲醇超聲提取 15min。然后用 0.45 微米的聚四氟乙烯針頭式過濾器（部件號(hào) 02542910）過濾樣品，再進(jìn)樣 2 μL 進(jìn)行分析。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論 12.5 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖如圖 2 所示，所有八種分析物的 洗脫時(shí)間剛超過 5 分鐘。此方法在所有緊密洗脫的峰之間提供 了色譜分離度。在對(duì)羥基苯甲酸異丙酯和對(duì)羥基苯甲酸 丙酯兩種異構(gòu)體之間可以獲得 3.0 的分離度，而在通常難以分 離的對(duì)羥基苯甲酸異丁酯和對(duì)羥基苯甲酸丁酯異構(gòu)體之間可 以獲得 1.8 的分離度。對(duì)羥基苯甲酸芐酯（峰 8）與對(duì)羥基苯 甲酸丁酯實(shí)現(xiàn)基線分離，其分離度為 2.4。

如表 2 所示，每種分析物的檢出限（LOD, S/N > 3:1）和定量限（LOQ, S/N > 10:1）都是由等級(jí) 1 校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品的平均結(jié)果 （n=6）計(jì)算獲得。表 2 還顯示了低濃度（1 μg/ mL）和高濃度（40 μg/mL）下的回收率和準(zhǔn)確度。用經(jīng)過檢測將不含任何 對(duì)羥基苯甲酸酯的面霜用于回收率研究，低濃度和高濃度下的回收率分別為 97.5 - 100.7% 和 101.1 - 102.4%。該方法還 顯示出較高的準(zhǔn)確度，在低濃度和高濃度下的準(zhǔn)確度分別為 95.7 - 97.4% 和 99.89 - 99.95%。

基于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)樣品的定量分析結(jié)果在表 3 中顯示。雖然 FDA 不要求在化妝品標(biāo)簽上列出含量，但他們確實(shí)要求準(zhǔn) 確標(biāo)注成分。所有檢測出的分析物均與每個(gè)產(chǎn)品的成分清單相符。保濕霜和爽膚水只含有 2-苯氧乙醇，而護(hù)手霜、面部保濕 乳液、身體乳和沐浴露都含有一系列對(duì)羥基苯甲酸酯混合物。這四個(gè)樣品中所含有的量均低于歐盟關(guān)于對(duì)羥基苯甲酸酯類總 濃度的限度 0.8 %（w/w）要求。在護(hù)手霜和面部保濕乳液中均檢測出對(duì)羥基苯甲酸丙酯并對(duì)其進(jìn)行了定量分析，發(fā)現(xiàn)兩個(gè) 樣品中對(duì)羥基苯甲酸丙酯的含量均低于歐盟規(guī)定的濃度限度 0.14 %（w/w）。同樣，所有檢測出含有 2-苯氧乙醇的樣品的含 量均低于歐盟 1.0 %（w/w）的最大濃度限度。 胡須清潔液和洗面奶的標(biāo)簽上都聲明不含對(duì)羥基苯甲酸酯，而且在分析中確實(shí)沒有檢測出對(duì)羥基苯甲酸酯。雖然在分析的檢 測波長下檢測到色譜峰，但將洗面奶樣品和等級(jí) 7（5 μg/mL）校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖疊加（圖 8）可以發(fā)現(xiàn)，這些色譜峰顯 然與任何關(guān)注的分析物的保留時(shí)間不一致。

結(jié)論 本研究表明，使用配備 MWD 檢測器的珀金埃爾默 LC 300  HPLC 系統(tǒng)可以對(duì)八種常用防腐劑進(jìn)行快速、穩(wěn)妥的色譜 分離和定量分析。結(jié)果表明，保留時(shí)間、重復(fù)性、回收率和 準(zhǔn)確度都表現(xiàn)優(yōu)異，并在檢測濃度范圍內(nèi)具有良好的線性。 該方法還可以為所有分析物提供 < 0.1 μg/mL的定量檢測 限 LOQ。 本研究關(guān)注于對(duì)八種不同市售個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品的分析，其中 兩種產(chǎn)品標(biāo)簽聲稱不含對(duì)羥基苯甲酸酯。分析結(jié)果與每個(gè) 樣品的成分標(biāo)簽一致，且結(jié)果顯示所有檢測出的防腐劑含 量都低于更嚴(yán)格的歐盟委員會(huì)法規(guī)規(guī)定的最大濃度限值