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組織切片的免疫熒光標記實驗

時間：2022/5/7閱讀：997

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免疫熒光標記技術(shù)（immunofluorescence technique）是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素，當與其相對應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時，在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗

原抗體結(jié)合部位，檢測出抗原或抗體。

實驗材料

組織樣品

試劑、試劑盒

PBS 抗體

儀器、耗材

玻片加濕盒

實驗步驟

1. 將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒，由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片，放入玻片盒中（每邊放6片），或故濕盒中（載玻片勿相互接觸）。

2. 待載玻片達室濕且未干時，鋪加PBS于切片上（勿溢出玻片）。

3. 稀釋的第一杭體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min（每一載玻片上加40~50 μl 抗體，應(yīng)能蓋住切片）。

4. 用與泵相連的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并從另一端加上抗體，蓋上加濕盒，室溫溫育1 h。

5. 以PBS冼玻片3次（5 min/次），從切片一端加入新的PBS緩沖液，由另一端吸去舊的緩沖液。

6. 稀釋的第二抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min（每載玻片可加40~50 μl 抗體）。

7. 將第二抗體加于切片上，置加濕盒中室溫溫育1 h，以PBS洗玻片3次（5 min/次）。

圖一、免疫組化標記的各種方法

8. 將蓋玻片放于紙巾上，滴加1滴Gelvatol 于蓋玻片中央。翻過載玻片放于蓋玻片上（勿施壓），將玻片置工作臺上，用鋁箔覆蓋避光放置30 min，使Gelvatol 凝結(jié)。

9. 顯微鏡下觀察結(jié)果，或置玻片盒中貯于4℃。

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