新生小鼠原代心肌成纖維細(xì)胞的分離與培養(yǎng)

1. 準(zhǔn)備0-1天內(nèi)的C57BL/6J小鼠新生鼠。

2. 用溫的無菌去離子水，輕輕擦拭每只新生鼠。

3. 用70%的乙醇去除新生鼠身體上的污染物。

4. 斷頭，取心臟，心臟置于冰的PBSG溶液中。

5. 除去血液和非心臟組織。

6. 剪碎心臟組織。

7. 加入胰酶-膠原酶消化液，每只新生鼠75ul。

8. 在37°C的搖床培養(yǎng)箱中，以250 rpm/ 5 min，消化心肌組織。

9. 輕輕渦旋，然后離心10秒，丟棄第一次消化的上清液。

10. 開始第二次消化，250 rpm/ 5 min后，輕輕渦旋，然后離心10秒，收集上清液到2倍體積的胎牛血清中。

11. 重復(fù)上述消化過程，共進(jìn)行8次消化，收集細(xì)胞懸液。

12. 使用沒有包被的10cm大皿，預(yù)種植細(xì)胞1h。

13. 1小時后，將培養(yǎng)皿從培養(yǎng)箱中取出，移除沒貼壁的細(xì)胞及上清液，加入完丨全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。