測定氧化應激的新技術

氧化應激（Oxidative Stress）是指體內氧化與抗氧化作用失衡，傾向于氧化，導致中性粒細胞炎性浸潤，蛋白酶分泌增加，產生大量氧化中間產物。氧化應激是由自由基在體內產生的一種負面作用，并被認為是導致衰老和疾病的一個重要因素。

細胞和組織內蛋白巰基的氧化狀態可指示氧化應激。然而，組織樣品中蛋白巰基氧化狀態的定量檢測還面臨一些技術障礙，譬如如何制備樣品而不影響其氧化狀態，以及如何檢測相對微小的變化。

zui近，澳大利亞西澳大學的研究人員開發出一種新的熒光技術，能克服上述問題，準確測定蛋白巰基的氧化狀態。他們通過熒光酶標儀可靠地測定蛋白巰基氧化狀態的整體微小變化，隨后通過SDS-PAGE檢測特定蛋白的氧化狀態。

他們開發出的這種新技術能改善蛋白溶解，并避免樣品中蛋白被認為氧化。在溶解步驟，還原型巰基被標上綠色熒光的BODIPY FL馬來酰亞胺。在去除了過量的BODIPY FL馬來酰亞胺之后，剩余的氧化型蛋白巰基被TCEP還原。隨后這種新生成的還原型氧化巰基與紅色熒光的Texas Red® 馬來酰亞胺相互作用，并去除多余的染料。

由于BODIPY® FL and Texas Red® 熒光基團顯示出極少的熒光發射重疊，因此，利用這兩種熒光染料標記蛋白能夠實現同一個樣品中氧化性和還原型蛋白巰基的定量測定，所需的儀器只是一臺熒光酶標儀。通過測定氧化型和還原型蛋白巰基，研究人員能夠檢測到生物樣品的微小差異。

此外，這種雙標記技術還能檢測特定蛋白的巰基氧化狀態。通過SDS-PAGE和熒光凝膠掃描儀，就能了解特定蛋白巰基的氧化狀態。