雙光束紫外-可見分光光度計核查操作規(guī)程

雙光束紫外-可見分光光度計核查操作規(guī)程工作原理

紫外可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進行分析的一種儀器分析方法。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子能級的躍遷，它廣泛用于無機和有機物質(zhì)的定性和定量分析。

雙光束紫外-可見分光光度計朗伯一一比耳定律（Lambet -Beer）是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。當(dāng)入射光波長一定時，溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)厚度（吸收光程）的函數(shù)。其常用表達(dá)式如下（式中ε為系數(shù)）：

A=ε·c·l

雙光束紫外-可見分光光度計是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器。根據(jù)光路設(shè)計的不同，紫外可見分光光度計可以分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。

1.2 適用范圍

雙光束紫外-可見分光光度計（以下簡稱儀器），系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開關(guān)（斬光器）分成為樣品和參比兩條光束結(jié)構(gòu)的儀器。它能消除光源不穩(wěn)和放大器增益變化的影響，并能自動記錄和掃描物質(zhì)的吸收光譜圖。儀器在開機后通常會做一些自檢，但仍應(yīng)按本規(guī)程進行檢定。儀器的波長范圍包括195~800nm，狹縫為0.1~5nm可調(diào)。

1.3 制定依據(jù)

本規(guī)程主要參照國家計量檢定規(guī)程《JJG 178-2007紫外、可見、近紅外分光光度計》、《JJF 1641-2017紫外可見分光光度計型式評價大綱》及《中國藥典》2015年版四部指導(dǎo)通則“0401紫外-可見分光光度法”擬定。

2.項目及技術(shù)要求

2.1 波長準(zhǔn)確度 ≤±1.0nm（紫外光區(qū)），≤±2.0nm（500nm附近）；

    波長重復(fù)性 ≤0.5nm。

2.2 基線平直度 ≤0.01 吸光度。

2.3 0%線噪聲  ≤0.1%，100%線噪聲  ≤0.5%.

2.4 吸光度準(zhǔn)確度 應(yīng)符合規(guī)定。

2.5 雜散光 <0.8%。

2.6 光譜帶寬 ≤標(biāo)示帶寬±20%。

2.7 吸收池配對誤差 ≤0.5%。

3 檢測條件

3.1 環(huán)境條件

3.1.1 室溫為10~30℃，相對濕度應(yīng)小于65%。

3.1.2 工作臺不受陽光直射，室內(nèi)應(yīng)無腐蝕性或其它影響測定的氣體干擾。

3.1.3 周圍應(yīng)無影響檢定的強電場、磁場和震動。

3.1.4 儀器檢定前，須先開機預(yù)熱半小時。馬弗爐

3.2 設(shè)備

鈥玻璃校正片。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑

氧化鈥（分析純）、高氯酸（分析純）、重鉻酸鉀（基準(zhǔn)品）、硫酸（分析純）、碘鈉（分析純）、亞硝酸鈉（分析純）。

4 檢測方法

4.1 波長準(zhǔn)確度和波長重復(fù)性的檢測

4.1.1 用氧化鈥溶液的241.13、278.10、287.18、333.44、345.47、361.31、416.28、451.30、485.29、536.64和640.52nm的吸收值進行檢定。檢定時先配制4%氧化鈥的10%高氯酸溶液，將儀器波長設(shè)置為700~200nm范圍，狹縫小于1nm，以空氣為空白，調(diào)節(jié)透光率為100%。取上述氧化鈥溶液，置1cm石英吸收池中，放入樣品光路，以適當(dāng)?shù)膾呙杷俣壤L制氧化鈥溶液的吸收圖譜并打印出峰值，與規(guī)定值相比較。重復(fù)測定三次，取平均值，計算波長準(zhǔn)確度與重復(fù)性。

4.1.2 用鈥玻璃校正片代替氧化鈥溶液，測定方法同上，其尖銳吸收峰主要有279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、536.2和637.5nm，校正片使用前必須經(jīng)過校正。

4.2 基線平直度的檢測

4.2.1 按儀器要求進行基線校正后，調(diào)節(jié)狹縫2nm，掃描速度中速，取樣間隔1nm，樣品和參比光路均為空氣。在儀器波長下限處加10nm，波長上限處減50nm范圍內(nèi)進行掃描，測量圖譜中起始點的吸光度與圖譜中偏離起始點多的吸光度（即大偏離點）之差即為基線平直度。

4.2.2 允許繪制的基線在更換光源或濾光片時微有跳動，必要時可在檢定前再進行一次基線校正。

4.3 0%線噪聲和100%線噪聲的測定

4.3.1 儀器設(shè)置為時間掃描方式，波長設(shè)置為250nm，狹縫1nm，樣品和參比光路均為空氣，調(diào)整透光率為100%，用適當(dāng)?shù)膾呙杷俣茸鰰r間掃描2分鐘，觀察100%線的變化，然后再將擋光塊插入樣品光路，觀察0%線的變化2分鐘，讀出各自峰的大（谷）值的差，與規(guī)定值比較。

4.3.2 儀器設(shè)置時間掃描方式，波長置500nm，按上述方法測定500nm波長處的100%和0%線噪聲。

4.3.3 如儀器無時間掃描方式，也可將儀器波長調(diào)至規(guī)定處，用目視觀察2分鐘，讀出各自峰的大（谷）值的差。

4.4 吸光度準(zhǔn)確度的檢測  將儀器波長設(shè)置于400~200nm，狹縫1nm，先用配對的吸收池均裝入0.005mol/L硫酸空白溶液，用合適的掃描速度記錄基線或自動校正基線，然后再將樣品光路改變放0.006%重鉻酸鉀硫酸溶液0.005mol/L硫酸空白溶液，掃描并打印峰谷值，計算吸收系數(shù)，重復(fù)測定三次，取其平均值與規(guī)定的吸收系數(shù)許可范圍進行比較，應(yīng)符合表中的規(guī)定。

波長（nm）

235

（小）

257

（大）

313

（小）

350

（大）

吸收系數(shù)（百分吸收系數(shù)）的規(guī)定值

124.5

144.0

48.6

106.6

吸收系數(shù)（百分吸收系數(shù)）的許可范圍

123.0~126.0

142.8~146.2

47.0~50.3

105.5~108.5

4.5 雜散光的檢查

測定前應(yīng)將擋光塊插入樣品池，校正儀器零點，其透光率應(yīng)為0.0%。按下表列的試劑和濃度，配置成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合表中規(guī)定。

試劑

濃度（%）

測定用波長（nm）

透光率（%）

碘鈉

1.00

220

<0.8%

亞硝酸鈉

5.00

340

<0.8%

4.6 光譜帶寬的測定

4.6.1 將儀器置于單光束能量測定方式，波長范圍置于660~650nm，選擇小狹縫，用合適的掃描速度進行波長掃描，繪制氘燈譜線，并使氘燈峰值為滿量程的三分之一，測量氘峰的半峰寬即為小光譜帶寬，與規(guī)定值比較。

4.6.2 沒有氘燈的儀器選擇汞燈546.1nm（或253.7nm）的特征譜線同4.6.1方法掃描并計算。

4.7 吸收池配對誤差的檢測

4.7.1 取洗凈的石英吸收池盛滿水，在220nm處，以其中一只透光率為100%，再分別更換其它吸收池，測其透光率，凡誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液，在350nm處，以其中一只透光率為100%，分別測定其它吸收池，凡透光率誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的即為配對的吸收池。

4.7.2 取洗凈的玻璃吸收池盛滿水，在660nm處，以其中一只透光率為100%，再分別更換其它吸收池，測其透光率，凡誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液，在400nm處，以其中一只透光率為100%，分別測定其它吸收池，凡透光率誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的即為配對的吸收池。

4.7.3 由于吸收池在不同波長吸光度有少許改變，在使用時，先測定配對誤差，必要時應(yīng)扣除。

5 檢測結(jié)果處理

自檢結(jié)果全部符合技術(shù)要求者，即為合格，可以使用。若檢測結(jié)果不符合規(guī)定，應(yīng)重新調(diào)試儀器再進行自檢，符合規(guī)定后方可使用。

6 檢驗周期

應(yīng)至少每年檢測一次，重要部件的維修和更換、變動放置地點、或?qū)x器性能有懷疑的，應(yīng)按本規(guī)程隨時進行自檢。