阻濕態(tài)微生物穿透儀試驗操作方法

阻濕態(tài)微生物穿透儀

濕態(tài)阻菌測試儀又稱為“ 阻濕態(tài)微生物穿透性測試儀”，RULLA 2濕態(tài)阻菌測試儀系標準ISO 22610 對阻濕態(tài)微生物穿透試驗的儀器，也是中國國家食品藥品監(jiān)督管理局標準YY/T 0506.6阻濕態(tài)微生物穿透試驗方法實驗儀器。

工作原理：

用鋼環(huán)將三層材料（試驗材料在下，菌片居中，高密度聚乙烯膜在上面）卡在一起，將此環(huán)套件置于轉盤上的瓊脂培養(yǎng)皿上，試驗指以能在整個培養(yǎng)皿表面上移動的方式使材料受到壓力和摩擦的綜合作用，以此模擬在實際應用過程中屏障材料可能發(fā)生的受力情況和濕態(tài)條件下的微生物穿透。菌片上的微生物穿透試驗材料后會遷移到瓊脂培養(yǎng)基表面，通過對瓊脂培養(yǎng)皿的培養(yǎng)和菌落計數，可對試驗材料的穿透性能進行定量評價。

基本結構：

該儀器有一個電驅動、電子計時器控制、轉速為60rpm的轉盤，轉盤上可安裝一個14cm直徑的瓊脂培養(yǎng)皿。帶有試驗指的平衡桿被一個轉速為5.60rpm的偏心軸所引導，可使重力為3±0.02N的試驗指從轉盤的中心向周邊作側向的往復運動。在一個試驗周期內，兩個運動的疊加，能使試驗指的作用軌跡均勻布滿整個圓盤表面。總重量為800±1g的內外鋼環(huán)在試驗中用以夾持供試材料并對材料施加標準的繃緊力。儀器還附帶一個直徑9cm、高4cm的圓柱體，用于在三層材料的固定過程中提供平整的表面和統(tǒng)一的繃緊度。

阻濕態(tài)微生物穿透儀

試驗方法：

1 菌片制備

金黃色葡萄球菌ATCC 29213在胰酶大豆瓊脂上36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h，將2-3個菌落接種至3ml胰酶大豆肉湯中，在36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h。用蛋白胨水1:10稀釋至濃度為1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，對終菌懸液進行計數。

打開無菌袋取出仍貼附在智商的聚氨酯膜，將載菌材料片的可浸濕聚氨酯膜面朝上放在潔凈度盤子上，為了便于操作，用雙面膠帶將載菌材料片的四角固定于盤子上。用培養(yǎng)皿蓋作為模板在載菌膜上化出一個相應的區(qū)域，在該區(qū)域涂布1.0ml金黃色葡萄球菌懸浮液，然后將菌片到56℃干燥大約30min，在干燥期間采用消毒的玻璃涂布器在載菌膜上繼續(xù)涂布菌懸液，以使菌液均勻分布。

菌片制備好后當日使用。

2 狀態(tài)調節(jié)

如需要，按照GB6529對試件進行狀態(tài)調節(jié)，也可在標準正常室溫條件下進行狀態(tài)天界和試驗。狀態(tài)調節(jié)的方法應記錄在試驗報告中。

3 試驗設定

調節(jié)控制桿上配重，使試驗指施加到瓊脂上的力值為3N±0.02N。

將一個瓊脂培養(yǎng)皿放在轉盤上。

4 材料應用

用下列計數：采用一個由內、外環(huán)組成的圓形砝碼，總重800g±1g對材料施加標準的繃緊力。將圓柱放在內環(huán)中央，再將試件覆蓋在圓柱體和內環(huán)上，將除去貼附紙后的菌片染菌面向下放在試件上。后在聚氨酯膜上覆蓋一層HDPE膜，向下推緊外環(huán)，使三層材料牢固的加在兩個環(huán)之間。

5 試驗

將上述環(huán)組件輕輕搭放在一個去下蓋子的瓊脂培養(yǎng)皿上，鋼環(huán)自由懸放于旋轉盤的外面，將試驗指置于皿口內測的HDPE膜上，這樣試件可與瓊脂表面接觸。試驗指按上述規(guī)定施加3N壓力，是儀器運行15min。

15min后立即取下環(huán)套件放在一邊。

從旋轉盤上取下一個培養(yǎng)皿并放上皿蓋。馬上將第二個培養(yǎng)皿和環(huán)套件放在旋轉盤上。

對后面的四個培養(yǎng)皿用同一個環(huán)套組件執(zhí)行上述步驟。

五個培養(yǎng)皿完成試驗后，取下菌片并棄去，將試件反轉，上面朝下用HDPE膜覆蓋。

在第六個培養(yǎng)皿上操作15min,即完成一個平行試驗組。

其余4片試件同樣按上述方法各運行六個培養(yǎng)皿各15min，每片試件使用一片新鮮制備的菌片。

如果瓊脂表面聚有液體，將其置于潔凈臺上干燥，將各瓊脂培養(yǎng)皿加蓋置于36℃±1℃培養(yǎng)48h。

計數每只培養(yǎng)皿中金黃色葡萄球菌菌落數，培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內的菌落數不計。

如果右一個皿或多個皿的計數大于750CFU（不包括上述的培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內的菌落數），可重新驚醒試驗。如果重新試驗仍有一個或多個皿計數大于750CFU，表明該材料不可能具有足夠的屏障特性，可終止試驗。