測(cè)定氨基酸的方法有哪些？

氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單元，具有極其重要的生理功能。氨基酸的檢測(cè)分析廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥、飼料、化妝品等與人類生活和健康密切相關(guān)的幾大行業(yè)。

測(cè)定氨基酸的方法：

1、雙指示劑甲醛滴定法（測(cè)定游離氨基酸）

有單指示劑滴定法、雙指示劑滴定法。

單指示劑有：百里酚酞,酚酞。雙指示劑有：中性紅—百里酚酞。

其原理均是用甲醛與NH2作用，使堿性消失，再用強(qiáng)堿滴定COOH。

測(cè)定：①樣品（溶液）（20—30mg氨基酸+H2O+3滴中性紅，用0.1N NaOH滴定至黃橙色 （V1）②樣品+中性甲醛+3滴百里酚酞，搖，靜1min，用0.1N NaOH滴定至淡藍(lán)色 （V2）。

計(jì)算： 氨基酸態(tài)氮（%）= [（V2－V1）×C×0.014]/W*100

式中：V1——用中性紅作指示劑滴定時(shí)消耗氫氧化鈉的體積,V2——用百里酚酞作指示劑滴定時(shí)耗氫氧化鈉的體積。

2、電位滴定法

（1）原理：加入甲醛，固定氨基堿性。用酸度計(jì)指示滴定終點(diǎn)，據(jù)加入甲醛后耗用NaOH量計(jì)算蛋白質(zhì)％。

適用于混濁及色深樣品的直接滴定。

（2）測(cè)定：①樣液用NaOH滴定至pH=7.5～8.2。

②加入中性20％甲醛后，用NaOH滴至pH=9.2。

③同時(shí)作空白試驗(yàn)。

（3）計(jì)算：

 

3、茚三酮比色法

（1）原理

氨基酸在堿性溶液中能與茚三酮作用生成藍(lán)紫色化合物，λmax=570nm其顏色深淺與氨基酸含量成正比。

（2）測(cè)定

①準(zhǔn)確吸取100μg/ml氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml至比色管中，補(bǔ)加水至相同體積。加入茚三酮、磷酸緩沖液各1ml，水浴中加熱15min。加水至（或轉(zhuǎn)入容量瓶中）25ml，靜置15min。在570nm下以空白液為參比液，測(cè)A，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

②樣品測(cè)定

吸取樣液1～5ml，用同樣條件下測(cè)A，查出氨基酸μg。

（3）計(jì)算

                                                 X

氨基酸總量（mg％）= ---------------×100

                                          m×1000