共培養遷移實驗|周細胞與肺微血管內皮細胞共培養遷移試驗

　　應用Ibidi傷口愈合插件進行共培養“傷口愈合”實驗，對周細胞與肺微血管內皮細胞做共培養遷移試驗。

　　實驗步驟:

　　1）鋪細胞（圖二）　　

　　將ibidi傷口愈合培養皿底部的保護膠帶撕除。在ibidi細胞插件的每孔中分別加入1.5 ×104的PMVECs和Pericyte的細胞懸液。注意不要大力晃動培養皿。以防止細胞不均勻。在37℃培養箱中孵育　　

　　圖二，ibidi傷口愈合插件中加入細胞

　　2）形成“劃痕”　　

　　采用無血清培養基饑餓細胞16小時。如圖四所示，小心的用鑷子夾住插件的一個角，將插件移除。　　

　　圖三，移除插件

　　移除插件后，要用顯微鏡檢查是否形成合格的“劃痕”。　　

　　小心的清洗細胞，之后加入2ml培養基進行培養（圖四）　　

　　采集并分析圖像：　　

　　在顯微鏡下選取能同時看到“劃痕”和兩邊細胞的視野進行成像，“劃痕”的方向最好是水平或者垂直。　　

　　采集0h和6h的圖像，觀測細胞的遷移率和細胞遷移方向，用中性粒周蛋白定位微管生長中心（MTOC）并用鬼筆環肽標記F-actin　　

　　由圖可見，相對于左側的對照，右邊的PAH來源的Pericytes遷移距離較短，并且從熒光標記圖上可見，紅色箭頭表示遷移的方向，PAH組無特定方向，不受PMVEC的影響。柱狀圖為統計結果。