ibidi與你共探顯微鏡奧秘，知識與技巧帶你沖破液面難題！

　　想改善您的顯微鏡圖像嗎？您對自己的圖像總是這樣感到不滿嗎？別擔心，在這里ibidi雷萌將幫助您獲得精美的圖像！在這里，雷萌將向您展示彎液面的形成是如何干擾相位對比顯微鏡成像的。如何能獲得清晰且對比度良好的圖像？

相差成像　

　　到目前為止，相襯是生物光學顯微鏡中較常用的方法。它是細胞培養和活細胞成像中成熟的顯微技術。當使用這種廉價的技術時，無需預先固定或標記，就可以在自然狀態下觀察活細胞。　　

　　未染色的活細胞幾乎不吸收光。光吸收不良導致圖像中強度分布的差異極小。這使得細胞在明場顯微鏡下幾乎不可見或根本不可見。當光穿過細胞時，會發生小的相移，這是人眼看不到的。在相差顯微鏡中，這些相移被轉換成振幅的變化，可以觀察到圖像對比度的差異。然而，這種無標記技術在很大程度上取決于光路中組件的正確對齊。這種對準可能會受到自然發生的彎液面效應的干擾，從而導致相襯變弱。　　

　　相差顯微鏡要考慮的一個重要問題是彎液面，它是在氣液界面自然形成的。這種現象會顯著降低圖像質量，尤其是在像標準96孔板這樣的小型培養孔中。由于彎液面而產生的衍射擾亂了光路內相位環和相位板的正確對準。　　　　

　　左邊具有彎液面的光束路徑未對準，右邊是無彎液面的光路對準正確，相位對比良好。　　

　　如何避免彎液面？　　　

　　ibidi開發出了多種解決方案完-美-地解決了這個問題——并保證出色的相位對比圖像：　　

　　* ibidi μ-Slide 15孔3D載玻片和μ-Plate 96孔3D載玻片　　

　　* ibidi channel μ-Slides通道載玻片　　

　　* ibidi μ-Slides PH+　

　　* ibidi μ-Dish 35 mm Quad四區塊 高壁培養皿　　

　　μ-Slide 15孔3D載玻片 (formerly μ-Slide Angiogenesis)和μ-Plate 96孔3D載玻片 (formerly μ-Plate Angiogenesis 96 Well)　　　　

　　ibidi μ -Slide 15 Well 3D 和μ-Plate 96 Well 3D （下圖右）提供理想的細胞培養容器：　

　　1）可獲得出色的相差圖像；　　

　　2）一種-獨-特-的幾何技巧，即“孔中孔”技術，抑制了彎液面的形成，并在整個觀察區域產生了良好的相位對比。　　

　　而普通的細胞培養容器（下圖左）：　　

　　1）氣液界面彎液面：大部分觀察區域相差較差。　　

　　2）凝膠表面的彎液面：不可能同時聚焦所有細胞。　　

　　ibidi channel μ-Slides通道載玻片　　

　　ibidi channel μ-Slides通道載玻片為相差顯微鏡提供了理想的光學條件。培養細胞時，通道自下而上充滿培養基。這在幾何上抑制了彎液面的形成，并在整個通道中實現了出色的相差。　　　　

　　ibidi μ-Slides PH+　　

　　ibidi μ-Slides PH+（有2 Well Ph+、4 Well Ph+兩種規格）專為相差顯微鏡設計。每個孔中的特殊中間擋板可避免彎液面形成并保證出色的相差——無論孔的那個部分都能完-美-成像。　　　

　　使用μ-Slide 2 Well Ph+、4 Well Ph+可減少彎液面，增加對比度良好的細胞面積。這種良好的對比是由于中間擋板產生的平行光束路徑。　　

　　Ph+孔與標準孔的比較：Ph+孔無彎液面效應　　　　

　　ibidi μ-Dish 35 mm Quad四區塊 高壁培養皿　　

　　中心擋板提供-卓-越-的相位對比度　　　

　　ibidi μ-Dish 35mm Quad四區塊高壁培養皿（左圖）居中的中間擋板減少了彎液面的形成，從而實現了出色的相位對比光學。同時，這種Ph+特征有利于細胞的均勻分布。　　

　　就像ibidi μ-Slide 2 Well Ph+和μ-Slider 4 Well Ph+一樣，μ-Dish 35mm Quad四區塊高壁培養皿將出色的細胞生長和出色的高分辨率顯微鏡結合在一起，無論是使用相差顯微鏡還是熒光顯微鏡。　　

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