蘭伯艾克斯|細胞培養(yǎng)中應注意的問題

培養(yǎng)基為什么偏紫色

為了方便觀察和感知培養(yǎng)液的狀況，我們可以在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。酚紅指示劑對于pH值在6-8范圍內非常敏感，呈現出從黃色到紫紅色的變化。當培養(yǎng)液偏酸時，酚紅會呈現偏黃色；而當培養(yǎng)液偏堿性時，酚紅會呈現偏紫色。

通常情況下，當培養(yǎng)液變成黃色時，這可能是由于細菌或細胞過度增長，產生了酸性物質。而當培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中，二氧化碳會逐漸溢出，導致pH偏堿性，從而使培養(yǎng)基呈現偏紫色。對于呈現偏紫色的培養(yǎng)基，我們可以通過通入經無菌過濾的二氧化碳來調整pH值后繼續(xù)使用。

然而，長時間未使用完的堿性培養(yǎng)基不建議繼續(xù)使用，因為它可能導致細胞生長停滯或死亡。以上是針對培養(yǎng)液顏色變化的一些解釋和建議。根據具體情況，可能需要進一步調整和優(yōu)化處理方法。

細胞培養(yǎng)的注意問題

1. 在細胞培養(yǎng)液中加入HEPES可以穩(wěn)定液體的pH值。HEPES的全稱是N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid，它是一種氫離子緩沖劑，可以在較長時間內維持恒定的pH范圍。HEPES對細胞沒有毒性作用，一般的細胞培養(yǎng)液中含有20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。

2. 使用培養(yǎng)基顏色變化作為換液的指標是一個實用但不準確的方法。在培養(yǎng)液中加入了指示劑酚紅，液體的顏色變化可以間接提示細胞生長的狀態(tài)。當細胞生長旺盛時，會產生酸性物質，導致液體呈黃色；相反，液體會呈紫紅色。但是，僅憑顏色變化來判斷細胞生長狀態(tài)是不夠的，還需要結合其他指標進行細胞觀察和評估。

3. pH值變化大會對細胞產生傷害，不利于細胞生長。

4. 不是所有的細胞培養(yǎng)基都適用相同的CO2濃度。CO2濃度的選擇取決于培養(yǎng)基中NaHCO3的濃度。CO2和溶液中的HCO3-形成緩沖體系，使整個培養(yǎng)體系的pH值維持在弱堿性（約為7）。當培養(yǎng)基暴露在空氣中時，HCO3-會迅速分解，導致pH值快速升高，從紅色變?yōu)樽仙?。當將培養(yǎng)基放入細胞培養(yǎng)箱中，在CO2的作用下，pH值會緩慢地從紫色變回紅色。

不同細胞培養(yǎng)基的NaHCO3濃度不同，使用不同細胞培養(yǎng)基時應選擇相應的CO2濃度。具體選擇的CO2濃度如下：

當NaHCO3濃度<1.5g/L時，所需CO2濃度為4%；當NaHCO3濃度處于1.5-2.2g/L之間時，所需CO2濃度為5%；

當NaHCO3濃度處于2.2-3.4g/L之間時，所需CO2濃度為7%；

當NaHCO3濃度>3.5g/L時，所需CO2濃度為10%。

當我們發(fā)現培養(yǎng)液的pH值在細胞不斷生長過程中發(fā)生異常變化時，我們應該采取以下措施：

1. 檢查二氧化碳濃度是否適當：根據培養(yǎng)基中的碳酸氫鈉濃度，調整培養(yǎng)箱中二氧化碳的百分比。對于2.0至3.7 g/L的碳酸氫鈉，使用5-10%的二氧化碳濃度?；蛘呖紤]使用不依賴二氧化碳的培養(yǎng)基。

2. 檢查培養(yǎng)瓶蓋是否太緊：將瓶蓋松開1/4圈。

3. 確保碳酸氫鹽緩沖充分：加入HEPES緩沖液，使最終濃度達到10-25 mM。

4. 檢查培養(yǎng)基中的鹽是否正確：在CO2條件下使用Earle's鹽培養(yǎng)基，在常氣環(huán)境下使用Hanks'鹽培養(yǎng)基。

5. 檢查是否有細菌、酵母或真菌污染：將培養(yǎng)物和培養(yǎng)基丟棄，嘗試去除污染的培養(yǎng)物。以上是處理培養(yǎng)液pH異常變化的一些常見方法，根據具體情況，可能需要進一步調整和優(yōu)化處理方法。