質粒轉染的操作步驟

來源：天津益元利康生物科技有限公司 2023年12月18日 06:35

　　質粒轉染的操作步驟

　　轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。質粒轉染對于哺乳細胞蛋白的表達至關重要，轉染的方法和步驟直接影響著轉染的成功與否。那么你知道質粒轉染的操作步驟有那些嗎？讓我們一起來看看吧！

　　以24孔板培養的哺乳動物細胞為例：

　　一、種細胞；

　　1. 貼壁細胞：轉染前一天每孔0.5-2×10E5個細胞接種于500ul培養基中，在轉染時細胞可長至90-95%匯合度。

　　2. 懸浮細胞：在配置轉染液前每孔4-8×10E5個細胞接種于500ul培養基中。

　　二、轉染液配置，每孔細胞用量如下：

　　1. 用50ul無血清培養基稀釋質粒DNA，輕輕混勻。

　　2. 取適量合適的質粒轉染試劑在50ul無血清培養基中稀釋，室溫孵育5min。

　　3. 將前兩步所稀釋的DNA和質粒轉染試劑混合，輕輕混勻，室溫放置30min。

　　三、在每孔細胞中加入混合后的轉染液，輕輕搖勻。

　　四、貼壁細胞可在轉染4-6h后更換培養基，懸浮細胞可在轉染后18-48h間進行細胞換液，轉染18-48h后可檢測基因mRNA水平表達。如果檢測蛋白表達，需在轉染后48-72h收集細胞樣品。

　　五、對于穩定轉染，在轉染24h后以1:10傳代培養，第二天可加入選擇培養基。

　　更多有關質粒轉染的操作步驟，請聯系天津益元利康生物科技有限公司。

相關產品

凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。

聯系我們