諾譜新材料甲烷磺酸體系陽離子色譜柱測定乳粉中的膽堿

諾譜新材料甲烷磺酸體系陽離子色譜柱測定乳粉中的膽堿

摘要：膽堿由 Adolph Strecker 于1849年從豬膽汁中分離得到，故又名膽素，直至上世紀三十年代才逐步明確其營養價值和作用。膽堿在食品領域主要應用于在嬰幼兒配方食品和孕婦妊娠期及哺乳期食品中，是嬰幼兒配方食品中必須添加的一種營養物質。人體內膽堿的主要源自于自身合成和食物獲取，一般不會出現膽堿缺乏，但對于嬰幼兒來說，其自身合成膽堿的能力有限，特別是在母乳不足的情況下，其機體所需膽堿的來源主要是嬰幼兒配方食品，故對嬰幼兒配方食品中膽堿含量的監測具有重要意義。膽堿是堿性強度與氫氧化鈉相似的一種含氮的有機堿性化合物, 在水溶液中可以完全電離。所以可以采用離子色譜法, 用陽離子交換柱測定膽堿的含量。本篇文章采用諾譜新材料甲烷磺酸體系陽離子MS-5C-P2型色譜柱對膽堿進行測試，方法線性良好, 重復性穩定, 適合奶粉中膽堿含量的日常檢測。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

離子色譜儀：IC6200系列，配備電導檢測器、陽離子抑制器、自動進樣器AS3110系列，皖儀科技公司。

分析柱：MS-5C-P2,4.6×250 mm,5μm，諾譜；

保護柱：MS-5CG，4×30 mm，諾譜；

膽堿標準工作溶液：100mg/L；

一次性注射器（5mL）；

水系微孔濾膜（0.45μm）；氣：高純氮氣（>99.99%）；濃鹽酸（HCl）；甲烷磺酸溶液：15mmol/L；C18固相萃取小柱；

1.2 溶液配制

1.2.1 系列標準工作溶液

依次精密移取膽堿標準工作溶液（100mg/L）0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL于一組100mL容量瓶中，用15mmol/L甲烷磺酸溶液定容，搖勻，配制成膽堿的質量濃度分別為下表的系列標準工作溶液。

標準曲線系列濃度梯度

1.2.2 檢出限溶液配制

精確移取膽堿標準工作溶液（100mg/L） 0.02mL于100mL容量瓶中，用15mmol/L甲烷磺酸溶液定容，搖勻，配制成膽堿的質量濃度為0.02mg/L標準工作溶液。

1.3 儀器工作條件

色譜柱：諾譜MS-5C-P2 ,4.6×250 mm,5μm；

保護柱：諾譜MS-5CG,4×30 mm；

色譜柱溫度：40 ℃；

電導池溫度：45 ℃；

淋洗液：26mM MSA ；

流速：1.0 mL／min ；

抑制器電流：78mA ；

進樣體積：100 μL。

1.4 樣品前處理

準確稱取2.5g（精確至0.0001g）半固態或固態試樣于50mL比色管中，加入1mol/L的鹽酸溶液25mL，加蓋，渦旋至試樣溶液中無結塊，混勻后放入70℃±2℃水浴中水解3h（每30min搖一次）。將水解液冷卻至室溫，轉移至50mL容量瓶并用水定容至刻度，混勻待用；將樣品稀釋適當倍數后采用過C18固相萃取柱處理及濾膜后進行檢測。

2 結果與討論

2.1 分離度驗證

在1.3儀器工作條件相同的條件下，對混合標準溶液進行測定，得到7種陽離子標準色譜圖如圖1所示。由圖1及表1可知，7種離子峰形對稱，形狀尖銳，各組分分離度良好。

圖1  7種離子混合標準溶液檢測譜圖

表1 7種離子混合標準溶液檢測結果

2.2 標準曲線線性驗證

將1.2.1中配制的標準曲線系列工作溶液于系統中，按

照1.3工作條件進行分析，得到標準曲線譜圖多點重疊譜圖如圖2，線性圖見下圖3，線性相關系數R為0.99981，線性良好。

圖2  膽堿標準溶液線性重疊譜圖

圖3 膽堿線性

2.3 檢出限驗證

當固態或半固態試樣稱樣量為2.5g時，方法檢出限為0.02mg/L，按照1.2.2中配制的膽堿標準工作溶液進行分析，樣品的測試結果見下圖4及表2，理論檢出限優于標準方法檢出限；

圖4 最低檢測濃度測試譜圖

表2 最低檢測濃度測試數據

2.4 重復性驗證

按照1.4樣品前處理方法的得到的樣品重復6次分析，測試譜圖及數據見下圖5及表3，保留時間的RSD值為0.132%，峰面積的RSD值為0.211%；

圖5 樣品重復性測試譜圖

表3 樣品重復性測試數據

2.5 樣品檢測

樣品1：甄選配方羊奶粉在重復性條件下獲得兩次獨立測定結果的絕對差值為算數平均值的1.04%，小于標準要求的10%。

圖6 樣品1測試譜圖

表4 樣品1測試數據

總結：根據譜圖和數據顯示，采用皖儀諾譜甲烷磺酸體系陽離子MS-5C-P2色譜柱進行測，定性定量重復性良好，分析結果穩定，測試條件可以應用于數據檢測。

3 結論

本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6200系列及諾譜甲烷磺酸體系陽離子MS-5C-P2,4.6×250mm,5μm型色譜柱對GB5413.20-2022食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中膽堿的測定進行系統適用性、標準曲線驗證、檢出限驗證、分離度驗證、重復性驗證，測試結果峰型較好，線性良好，分離度較好，重復性滿足要求，靈敏度高，完全滿足國標GB5413.20-2022食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中膽堿的測定的測試要求。