細胞凋亡檢測方法

來源：上海晨曄生物科技有限公司 2024年07月24日 10:38

　　細胞凋亡檢測是生物學和醫學研究中的重要環節，用于確定細胞是否發生了程序性死亡。細胞凋亡是一種由基因決定的細胞自動結束生命的過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等，與生物體的正常發育、免疫系統控制、老化細胞清除等密切相關。以下是細胞凋亡檢測的主要方法：

　　一、形態學檢測

　　光學顯微鏡和倒置顯微鏡：

　　凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現發泡現象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。

　　貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。

　　常用姬姆薩染色、瑞氏染色等方法觀察細胞核染色質的形態學改變，如染色質濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質分割成塊狀等。

　　電子顯微鏡：

　　透射電子顯微鏡觀察是判斷凋經典、可靠的方法，被認為是鑒定細胞凋亡的金標準。

　　凋亡細胞在電鏡下體積變小，細胞質濃縮，細胞核內染色質高度盤繞，出現空泡結構，晚期細胞核裂解為碎塊，產生凋亡小體。

　　二、基于生物學功能的方法

　　Annexin V/PI雙染色法：

　　Annexin V是一種對磷脂酰絲氨酸(PS)有高度親和力的Ca²?依賴性磷脂結合蛋白，而PS在細胞凋亡早期會從細胞膜內側翻轉到外側。

　　通過熒光標記的Annexin V與PI聯合染色，可以區分正常細胞(Annexin V-/PI-)、早期凋亡細胞(Annexin V+/PI-)和晚期凋亡細胞及壞死細胞(Annexin V+/PI+)。

　　線粒體膜電位檢測：

　　細胞凋亡早期，線粒體膜通透性增加，膜電位下降甚至消失。

　　常用親脂性陽離子染料如JC-1，通過熒光顯微鏡觀察熒光的強弱來檢測線粒體膜電位的變化。

　　三、基于生化標記的方法

　　Caspase活性檢測：

　　Caspase蛋白家族的活化是細胞凋亡的典型特征，其中Caspase-3是凋亡通路下游的關鍵執行分子。

　　通過檢測Caspase-3的活性或剪切體的含量，可以反映細胞凋亡的過程。

　　TUNEL檢測：

　　TUNEL法(TdT介導的dUTP末端標記法)利用末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)催化熒光素標記的dUTP與斷裂DNA的3'-OH末端結合，從而檢測DNA斷裂。

　　該方法靈敏度高、背景干擾小、毒性低，可定量檢測不同細胞或組織樣本的凋亡情況。

　　四、其他方法

　　DNA含量測定：通過熒光染料檢測或細胞流式分析技術檢測細胞內DNA含量，確定細胞凋亡程度。

　　酶聯免疫吸附法(ELISA)核小體測定：檢測凋亡細胞裂解后釋放的核小體，以判斷細胞凋亡的發生。

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