從分析到制備的無縫工作流程（一） 島津分析制備雙流路系統鼎力相助

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制備液相系統常用于混合樣品中目標化合物的分離純化，建立合適高效的分析條件是獲取高純度目標化合物的重要環節之一。分析條件的優化通常在分析規模上進行，這一過程包含流動相篩選、梯度優化等，各環節都需要消耗大量時間。此外，樣品回收后純度復測通常需要手動轉移至進樣器完成，增加了人力成本。因此，本文以氫化可的松的純化過程為例，展示島津分析制備雙流路系統搭配LabSolutions MD方法開發軟件，將條件優化、放大制備、純度復測等過程集中于單一系統中，以完成整個工作流程。

圖1 制備純化的工作流程

島津分析制備雙流路系統

ü                      單一系統實現從分析到制備的方法放大及純度和回收率的確認

ü                      利用方法開發軟件（LabSolutions MD）自動創建分析方案并實現分離條件優化

ü                      LH-40液體處理器可直接將餾分再進樣于分析流路，完成純度檢測

分析規模下分離條件的優化

條件優化前，氫化可的松與主要雜質水楊酸之間非常接近（圖2）。此時如果增加上樣量可能影響兩種化合物之間分離進一步惡化，從而導致回收率降低。因此，優化分離條件至關重要。常規的優化方式，往往需要人為設置多個方法來逐個驗證，消耗大量時間且過程復雜繁瑣。LabSolutions MD是一款支持方法開發的專用軟件，通過對不同參數的設定，可自動生成分析時間表，提高優化效率。在本案例中，設置了三個初始濃度及三種不同水平梯度，可生成九種分析方案（圖3），獲得如圖4所示的分析結果。其中方案③分離度最好。

圖2 分離條件優化前色譜圖

圖3 LabSolutions MD自動生成分析方案

圖4 LabSolutions MD優化分離條件結果

方法③為最優選擇

上樣量的優化

在前序優化條件下，分別注入10、20、30、40、50和100µL的氫化可的松溶液（10000mg/L）。在100μL進樣時，氫化可的松和水楊酸的分離并不充分（圖5中藍色橢圓內），同時出現了一個未知的小峰（圖5中紅色圓圈），表明氫化可的松沒有完全分離。而當進樣量為50µL時，氫化可的松與相鄰峰分離良好。因此，采用50µL為分析條件進樣量。

完成上述工作后，根據制備柱及分析柱之間橫截面積比將已優化分析條件放大至制備規模，進行制備純化過程。

圖5 不同上樣量的優化結果

目標化合物的收集

當完成條件優化后，將方法放大至制備規模進行目標化合物的收集。使用紫外檢測器信號觸發收集。放大后，氫化可的松與水楊酸之間保持充分分離的狀態（圖6）。

圖6 UV觸發制備色譜圖

純度及回收率的確認

利用LH-40可進樣的特點，將已收集的氫化可的松重新注入分析流路進行檢測，同時將氫化可的松標準混合溶液進樣分析。根據標準品及回收目標化合物純度色譜圖，采用面積歸一化法，獲得的目標化合物純度以及回收率均保持在較高的水平。

圖7 純度檢測色譜圖

總結

利用島津分析制備雙流路系統與LabSolutions MD軟件的高效結合，可以將制備純化分析的全過程統一于單一系統完成。該流程包括在分析規模上優化分離條件、擴大分餾規模以及確認純度和回收率等?？梢杂行У奶岣咧苽湫?，同時降低成本，減少實驗過程中人為因素的干擾。

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