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Anti-Flag 親和凝膠

MCE 國(guó)際站：Anti-Flag Affinity Gel

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-K0217

中文名稱：Anti-Flag 親和凝膠

存儲(chǔ)條件：-20℃, 2 年

產(chǎn)品活性：MCE Anti-Flag 親和凝膠用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 Flag 標(biāo)簽蛋白的免疫沉淀、蛋白純化實(shí)驗(yàn)。

生物活性：MCE Anti-Flag 親和凝膠是由高質(zhì)量的鼠源 lgG2b 單克隆抗體與瓊脂糖 Sepharose 4B 共價(jià)偶聯(lián)而得，具有較高的 Flag (DYKDDDDK) 標(biāo)簽融合蛋白結(jié)合容量 (>1.1 mg 蛋白/mL)，可用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 Flag 標(biāo)簽蛋白的免疫沉淀 (IP) 實(shí)驗(yàn)。 特點(diǎn)： 1. 方便省時(shí) 2. 非特異性結(jié)合低 3. 樣品損失少 4. 載量 > 1.1 mg/mL. 本產(chǎn)品的規(guī)格與實(shí)際凝膠體積一致，凝膠含量為 50%。

操作流程：1. 凝膠預(yù)處理 1.1 將 Anti-Flag 親和凝膠重懸混勻，吸取 10 μL 凝膠懸液 (約 5 μL 凝膠) 至干凈的 1.5 mL 離心管。1.2 加入 600 μL 洗滌緩沖液，混合均勻，10,000 rpm 離心 30 秒，棄去上清。重復(fù) 3-4 次。 注：小心吸取上清，避免凝膠損失。2. 樣品的結(jié)合2.1 在上述清洗干凈的凝膠中加入 500 μL 細(xì)胞裂解液。充分混勻后，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上孵育，4℃ 孵育 2 小時(shí) (如需提高結(jié)合效率，可延長(zhǎng)至過(guò)夜)。2.2 10,000 rpm 離心 30 秒，將上清轉(zhuǎn)移至新離心管 (上清液可用于檢測(cè) Flag 標(biāo)簽蛋白是否有殘留)。3. 洗滌在上述分離得到的凝膠中加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸凝膠，10,000 rpm 離心 30 秒，棄去上清。重復(fù)以上洗滌步驟 3 次以上，直到洗滌后的上清液中 OD280 小于 0.05 為止。注意：如上清液的 OD280 大于 0.05，適當(dāng)增加洗滌次數(shù)即可。4. 洗脫本說(shuō)明書(shū)提供三種 Flag 標(biāo)簽蛋白洗脫方案，操作者可根據(jù)需要選擇不同的洗脫方案。4.1 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測(cè)。步驟：在上述洗滌干凈的凝膠中加入 50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer，充分混勻后煮沸 5 分鐘。10,000 rpm 離心 30 秒，取 4 μL 上清液進(jìn)行 SDS-PAGE 檢測(cè)。4.2 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步驟：在上述洗滌干凈的凝膠中加入 50 μL 洗脫緩沖液 A，充分混勻后室溫孵育 10 分鐘。10,000 rpm 離心 30 秒，收集上清。按照每 50 μL 洗脫液加入 25 μL 中和緩沖液的比例加入中和緩沖液，將洗脫產(chǎn)物 pH 調(diào)節(jié)至中性，樣品可用于后期功能分析。4.3 競(jìng)爭(zhēng)性洗脫：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。 步驟：在上述洗滌干凈的凝膠中加入 30-50 μL 洗脫緩沖液 B。充分混勻后，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上孵育，室溫孵育 1 小時(shí)或 4℃ 孵育 2 小時(shí)。10,000 rpm 離心 30 秒，收集上清，即得目的蛋白，樣品可用于后期功能分析。

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