NK細胞培養基的培養方法

來源：重慶市華雅干細胞技術有限公司 2025年05月06日 17:12

NK細胞培養基的培養方法需結合細胞來源、培養體系及目標需求設計，核心步驟涵蓋培養基配制、細胞分離與接種、動態培養管理三大模塊，以下為具體說明：

一、培養基配制與預處理

基礎培養基選擇

常用RPMI-1640、DMEM或X-VIVO15等無血清培養基，需添加5%-10%自體血漿或人AB型血清（滅活處理）。例如，X-VIVO15培養基中需補充5%血清，并加入200U/mLIL-2、10ng/mLIL-15及處理的K562細胞。

生長因子組合

核心因子包括IL-2（促進增殖）、IL-15（維持存活）、IL-12（增強抗原敏感性）及IL-21（提升細胞毒性）。例如，HER2單抗誘導體系中，需添加1000-2000IU/mLIL-2、20-40ng/mLIL-12、60-100ng/mLIL-15、30-60ng/mLIL-18。

包被處理

培養容器需提前包被抗CD3抗體或HER2單抗（如1-3mg/mL曲妥珠單抗，37℃包被1-2小時），以增強細胞黏附與激活效率。

二、細胞分離與接種

外周血來源NK細胞分離

通過Ficoll密度梯度離心法分離PBMC，洗滌后重懸于含5%血清的培養基中，調整細胞密度至1×10?cells/mL。

臍帶血來源NK細胞分選

使用CD34陽性選擇磁珠分離造血干細胞/祖細胞，接種于含20ng/mLSCF、10ng/mLIL-15、10ng/mLFLT3L、20ng/mLIL-7的造血干細胞分化培養基中，誘導分化為NK細胞。

接種密度控制

初始接種密度建議為1.5-2×10?cells/mL，培養體積根據容器調整（如T75培養瓶終體積25mL，細胞培養袋終體積750-1500mL）。

三、動態培養管理

培養條件

溫度37℃、5%CO?、飽和濕度，每2-3天更換一半體積培養基，補充細胞因子與滅活血漿。例如，第7天轉袋后需加入含1000-2000IU/mLIL-2和20-50ng/mLIL-21的培養基。

細胞擴增與監測

培養14-21天，期間每2-3天進行細胞計數與形態觀察。第10天后按1.5倍補加培養基，第14-15天可收獲1×10?-2×10?cells的NK細胞。

質量控制

培養第13天需檢測細菌、內毒素與支原體，收獲前通過流式細胞術鑒定表型（如CD56?CD3?）。若增殖停滯，可加入優化劑（如25μL/100mL培養基）。

相關產品

凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。

聯系我們