電泳儀的操作步驟中，處理樣品時有哪些注意事項？

電泳儀的操作步驟中，處理樣品時有哪些注意事項？

樣品的收集與保存

• 保持生物活性：如果樣品是生物組織或細胞中的蛋白質、核酸等生物大分子，在收集過程中要盡量保持其生物活性，避免使用過熱、過酸、過堿等可能導致生物大分子變性的條件。例如，在提取蛋白質時，要在低溫環境下進行，并加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白質被降解。

• 防止核酸酶污染：對于核酸樣品，要特別注意防止核酸酶的污染，因為核酸酶會降解核酸。所有用于核酸處理的試劑和器材都要經過嚴格的滅菌處理，并且要避免樣品與手指等可能帶有核酸酶的物體接觸。

• 合適的保存條件：收集到的樣品若不能立即進行電泳分析，需要根據樣品的性質選擇合適的保存條件。一般來說，蛋白質樣品可以在 - 20℃或 - 80℃下冷凍保存，但要注意避免反復凍融，以免蛋白質變性；核酸樣品則可以在 - 20℃保存，對于長期保存的 DNA 樣品，也可以加入適量的無水乙醇，在 - 80℃下保存。

樣品的溶解與稀釋

• 選擇合適的溶劑：根據樣品的性質選擇合適的溶劑來溶解樣品。對于蛋白質樣品，常用的溶劑有 Tris - HCl 緩沖液、PBS 緩沖液等，并且要根據蛋白質的等電點調整緩沖液的 pH 值，使蛋白質能夠充分溶解并帶上適當的電荷。對于核酸樣品，一般使用 TE 緩沖液（Tris - EDTA 緩沖液）來溶解，EDTA 的作用是螯合金屬離子，防止核酸酶對核酸的降解。

• 控制濃度：樣品的濃度要適中，過濃的樣品可能導致電泳條帶拖尾、變形或分辨率降低，過稀的樣品則可能無法檢測到清晰的條帶。在進行電泳之前，需要通過定量分析方法（如蛋白質定量的 Bradford 法、BCA 法，核酸定量的紫外分光光度法等）準確測定樣品的濃度，并根據實驗要求進行適當的稀釋。

加入緩沖液和添加劑

• 緩沖液的選擇：加入的緩沖液要與電泳緩沖液相匹配，以保證在電泳過程中樣品所處的環境 pH 值穩定。不同的電泳體系需要使用不同的緩沖液，如 SDS - PAGE 電泳常用 Tris - 甘氨酸緩沖液，而等電聚焦電泳則需要使用專門的兩性電解質緩沖液。

• 添加劑的使用：根據實驗目的，可能需要在樣品中加入一些添加劑。例如，在蛋白質 SDS - PAGE 電泳中，需要加入十二烷基硫酸鈉（SDS）和 β - 巰基乙醇等。SDS 可以使蛋白質變性并帶上負電荷，β - 巰基乙醇則可以還原蛋白質中的二硫鍵，使蛋白質亞基充分分離。在核酸電泳中，有時會加入溴化乙錠（EB）等染料，以便在電泳后能夠通過紫外光照射觀察核酸條帶，但要注意 EB 是一種強致癌物質，使用時需小心操作并做好防護。

混合與離心

• 充分混合：加入緩沖液和添加劑后，要充分混合樣品，使樣品中的成分均勻分布?？梢允褂脺u旋振蕩器或移液器反復吹打等方法進行混合，但要注意避免產生過多的氣泡，以免影響后續的加樣操作。

• 離心處理：混合后的樣品一般需要進行離心處理，以去除可能存在的不溶性雜質或氣泡。離心速度和時間根據樣品的性質和體積而定，一般蛋白質樣品可以在 10000 - 15000rpm 下離心 5 - 10 分鐘，核酸樣品則可以在較低的速度下（如 5000 - 8000rpm）離心 3 - 5 分鐘。離心后的樣品取上清液用于電泳加樣