毫米視場微型化雙光子顯微鏡發(fā)布

通過梯度折射率透鏡GRIN Lens中繼的顯微成像中，GRIN Lens引入的像差會大大降低成像質量。為了測試FHIRM-LF探頭在GRIN Lens下的效果，作者通過GRIN Lens中繼成像對自由運動小鼠海馬神經元進行觀察 (圖2)。在成像探頭視場為1000 × 788 μm2，成像幀率為9 Hz, 600 × 512像素條件下，盡管成像視場范圍由于GRIN Lens自身的漸暈作用略受影響，但其有效視場仍達到約為900 × 788 μm2。通過GRIN Lens對自由運動小鼠海馬背側CA1亞區(qū)進行成像記錄，該款成像探頭FHIRM-LF實現(xiàn)共計約400個神經元鈣瞬態(tài)數(shù)據(jù)的高質量采集，這些原始數(shù)據(jù)的平均信噪比為9.2，98%的神經元鈣瞬態(tài)信噪比大于3。

圖2. 通過直徑為1mm的GRIN Lens對自由運動的小鼠海馬背側CA1進行中繼成像。利用FHIRM-LF對自由活動小鼠進行連續(xù)18.3分鐘的成像記錄，圖中展示所記錄的395個神經元分割圖及Ca2+痕跡，并展示這些神經元鈣瞬態(tài)的信噪比。

毫米級視野下深達500 μm的自由變焦

超維景微型化雙光子顯微鏡系統(tǒng)配備先進的軸向變焦ETL模塊。利用液體透鏡原理，實現(xiàn)微型化雙光子顯微鏡對大腦皮層不同功能層神經元的同時成像記錄。結合可拆卸變焦ETL模塊，毫米大視野探頭FHIRM-LF軸向變焦范圍擴大到500 μm，在對小鼠大腦皮層成像中實現(xiàn)采集1000 × 788 × 500 μm3體積的神經元圖像（圖3）。并且搭載變焦ETL模塊后，雙光子顯微成像仍以接近理論衍射極限的能力，保持成像分辨率恒定不變。

圖3. FHIRM-LF結合可拆卸的變焦ETL模塊對清醒小鼠皮層1000×788×500 μm3的三維體積成像。