微生物基本知識：細胞學技術的一般環節及操作方法！

一、紡錘體阻斷劑（Spindle inhibitor）

在有絲分裂過程中，隨著紡錘絲的形成，染色體被牽引到一起難以觀察其形態。紡錘體的形成在于細胞質和紡錘體成分的粘度之間的平衡，因此，改變細胞質的粘度，即可破壞紡錘體形成，從而使得染色體均勻散開，且染色體縊痕區更為清楚。

在培養中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素，在終止培養前加入適量秋水仙素，使正在分裂的細胞停留在中期，以獲得大量分裂相供分析之用。秋水仙素的濃度范圍比較寬，一般使用濃度0.05—0.8微克/毫升，在終止培養前處理2—4小時。但在實際工作中需要借助濃度和處理時間來控制染色體的收縮程度。秋水仙素作用時間越長，被阻斷的中期分裂相越多，但是染色體也越凝聚和收縮，所以還視各實驗室經驗而定。

二、低滲液（hypotonic solution）

低滲液是指滲透壓和離子強度均低于正常細胞生理條件的溶液，例如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀（0.65M）、（0.075M）等。低滲效果取決于低滲液的化學組成、低滲的溫度和處理時間。低滲處理是憑借反滲透作用使細胞膨脹染色體鋪展，同時可使粘附于染色體的核仁物質散開，以便能在一個平面上觀察所有染色體形態。

實驗室中一般選用0.075M KCl為低滲液（具體情況取決于實際操作，鑒于實驗的連續性和穩定性，本實驗室采用0.35%KCl），其優點有：①染色體輪廓清楚，可染色性強，染色時間短，②用于顯帶染色時能充分顯示帶型特點。

低滲處理為37℃，15－25分鐘，以預實驗條件為準。

三、固定液

固定液的重要特性是能迅速穿透細胞，將其固定并維持染色體結構的完整性，還要能夠增強染色體的嗜堿性，達到優良染色效果。

單純的固定液一般難以達到這些要求，因此在實驗中使用兩種混和的固定液。由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱的卡諾氏固定液是效果良好的固定液。Carnoy固定液（甲醇:冰乙酸=3:l）每次使用前需臨時配制，長時間放置影響固定效果，固定時間15分鐘至24小時，冰箱、室溫均可。必要時可改變甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于細胞膨脹、染色體鋪展，但易導致細胞破裂、染色體散失。

四、滴片

滴片使細胞懸液從一定高處落在載玻片上，淋巴母細胞膜破裂，染色體分散開。載玻片可用冰片和干片，效果均好。滴片后需空氣干燥。

五、Giemsa染色

Giemsa染料不是一種單一染料，而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物，配制后原液儲存。在常規染色中，并不比其他染料，但在顯帶技術中，卻是的。

Giemsa工作液在使用前臨時配制，濃度可在2.5-10%之間（原液2份加pH7.4磷酸緩沖液10－40份）。染色后，染色質呈紅色，細胞核是藍色。

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