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單人單面超凈工作臺在細胞培養(yǎng)中的無菌操作實踐是確保細胞培養(yǎng)成功和避免污染的關(guān)鍵步驟。以下是一個詳細的無菌操作實踐指南：
一、準(zhǔn)備工作
1.清潔與消毒：
使用前，確保超凈工作臺內(nèi)部及周圍環(huán)境已清潔，無塵埃和雜物。
使用75%酒精擦拭超凈工作臺臺面及臺面上所有物品，包括移液槍等。
提前30分鐘打開超凈工作臺的紫外燈，進行工作區(qū)表面積累的微生物的滅菌處理。滅菌完成后應(yīng)關(guān)閉紫外燈30分鐘，讓臭氧轉(zhuǎn)化為氧氣，避免對操作人員身體的刺激。
2.預(yù)熱設(shè)備：
將水浴鍋預(yù)熱至37攝氏度，用于后續(xù)的培養(yǎng)基預(yù)熱和細胞解凍。
確保超凈工作臺的風(fēng)機正常運轉(zhuǎn)，提供無菌而均勻的空氣環(huán)境。
3.穿戴防護裝備：
實驗人員應(yīng)穿戴一次性口罩、帽子和醫(yī)用乳膠手套，以防止污染。
注意手及指甲的清潔，避免戳破手套。
二、無菌操作過程
1.配置培養(yǎng)基：
在超凈工作臺內(nèi)，按照實驗要求配置培養(yǎng)基，注意無菌操作。
培養(yǎng)基應(yīng)預(yù)熱至37攝氏度，以減少對細胞的冷沖擊。
2.細胞解凍與培養(yǎng)：
將凍存的細胞從液氮罐中取出，迅速放入37攝氏度的水浴鍋中不斷晃動至融化。
將解凍后的細胞懸液放入離心機中離心，去除上清液，加入新鮮的培養(yǎng)基制成細胞懸液。
將細胞懸液加入細胞培養(yǎng)瓶中，放入37攝氏度、5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
3.細胞傳代：
從培養(yǎng)箱中取出細胞培養(yǎng)瓶，噴灑酒精并擦拭后放入超凈工作臺。
倒出或吸出上一次的培養(yǎng)基，使用PBS清洗細胞表面分泌物。
加入適量的胰酶進行消化，直至大部分細胞呈圓形。
加入培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞制成細胞懸液。
將細胞懸液按一定比例分裝入新的細胞培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。
三、注意事項
1.無菌操作原則：
在整個實驗過程中，應(yīng)嚴格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，防止污染。
使用酒精燈灼燒試劑瓶口和鑷子等工具，確保無菌。
2.超凈工作臺的使用與維護：
使用超凈工作臺時，應(yīng)適當(dāng)打開移門，保持操作區(qū)域的無菌環(huán)境。
工作完畢后，用75%的酒精擦拭凈化工作臺面，關(guān)閉送風(fēng)機，再次打開紫外燈進行滅菌處理。
定期更換高效過濾器，并清洗初效過濾器，以保持超凈工作臺的工作效能。
3.實驗人員的防護：
實驗人員應(yīng)定期進行健康檢查，確保無傳染病等疾病。
在實驗過程中，應(yīng)隨時注意個人防護，避免污染和交叉感染。
單人單面超凈工作臺在細胞培養(yǎng)中的無菌操作實踐需要嚴格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，注意超凈工作臺的使用與維護，以及實驗人員的個人防護。這些措施有助于確保細胞培養(yǎng)的成功和避免污染的發(fā)生。
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