尺寸排阻色譜柱是一種廣泛應用于生物分析領域的工具,其工作原理主要基于分子大小差異進行分離。利用柱內固定相中孔隙與分子間的物理作用來實現分離。具體來說,聚合物分子在柱子中的孔道中被篩選,較大的分子無法通過尺寸較小的孔道,只有較小的分子才能通過這些孔道,從而實現不同分子尺寸的分離。其優點在于其分離速度快、操作簡單、分離效果好。此外,該技術不依賴于分子之間的親和性或化學性質,因此適用于各種生物大分子,如蛋白質、多肽和核酸等的分離。
尺寸排阻色譜柱的安裝過程:
1、連接入口端:將色譜柱的入口端與液相色譜儀的泵出口管道牢固連接,一般采用不銹鋼管或聚醚醚酮(PEEK)管。連接時要確保管道插入色譜柱入口端足夠的深度,并使用合適的扳手擰緊接頭,防止泄漏,但注意避免過度用力擰緊而損壞色譜柱入口端的連接部件。可以在接頭處適當涂抹密封脂增強密封效果。
2、安裝柱頭過濾器:在色譜柱入口處安裝柱頭過濾器,其作用是防止樣品中的顆粒雜質進入色譜柱造成堵塞。將柱頭過濾器放置在色譜柱入口端,通過螺紋連接或卡套連接等方式固定在色譜柱上,確保安裝方向正確且與色譜柱入口緊密貼合,防止出現死體積過大的情況。
3、連接出口端:把色譜柱的出口端與檢測器的流通池入口連接起來,同樣使用合適的管道并保證連接牢固且無泄漏。連接完成后,將柱尾螺母擰緊在色譜柱出口端以確保密封良好。注意不要讓任何雜質進入色譜柱內部。
4、調整色譜柱位置:根據液相色譜儀的結構和使用要求,將安裝好色譜柱的流路部分放置在合適的位置。如果有溫控要求的色譜柱,需將其安裝在溫度控制器相應的位置,確保色譜柱能在設定溫度下工作。調整時要避免對色譜柱造成碰撞或施加過大外力,防止破壞其內部填料結構。
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