端粒酶活性檢測檢測法的優缺點對比

端粒酶活性和催化亞基hTERT基因表達量作為重要的腫瘤標志物，與90%惡性腫瘤呈正相關，可應用于干細胞成瘤性快檢。中檢院在進行干細胞制品質量復核時，也是進行端粒酶活性檢查，采用端粒酶活性（TRAP法）和hTERT基因表達量的方法，這兩種方法的檢測結果是一致的。   

1. 直接檢測法（如TRAP法及其衍生技術）

優點：

直接檢測端粒酶活性：通過延伸端粒重復序列（TTAGGG）來反映端粒酶的生物學功能，是端粒酶活性檢測的“金標準”。

廣泛應用：TRAP法是經典方法，經過多年優化（如RQ-TRAP、TRAP-ELISA等），在科研和臨床中有較多文獻支持。

缺點：

操作復雜：需抽提蛋白、端粒酶延伸反應、PCR擴增（QPCR/電泳/雜交）等多步驟，耗時耗力，技術難度高。

穩定性差：樣本處理（如蛋白提?。┮讓е露肆Ｃ甘Щ?，影響結果可靠性。

靈敏度與特異性不足：SYBR Green法引物特異性較差，易產生非特異性擴增；ELISA法重復性不佳，易受干擾；低豐度樣本（如少量腫瘤細胞）檢測受限。

2. 間接檢測法（如hTERT基因表達檢測，Biowing試劑盒為代表）

優點：

操作簡便：無需蛋白提取和延伸反應，直接檢測hTERT mRNA表達，步驟少、耗時短。

高靈敏度與穩定性：雙色熒光TaqMan探針法特異性強，優于SYBR Green；兩套檢測系統信號放大，靈敏度更高（尤其對低表達樣本）；結果重復性好，受樣本處理影響小。

配套完善：提供陽性和陰性對照標準品，支持定性和定量分析。

技術成熟：適用于高通量篩查。

缺點：

間接反映活性：依賴PCR技術，需嚴格防止RNA降解。

總結對比