小鼠角膜上皮細胞的復蘇與傳代及凍存操作說明！

細胞簡介

平臺編號：Bio-129568

規格：1×10?Cells/T25培養瓶

細胞信息：TKE2

細胞名稱：小鼠角膜上皮細胞TKE2

產品規格：T25培養瓶x1；1.5ml凍存管x2

細胞數量：1x10^6；1x10^6

保存溫度：37℃；-198℃

運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸

安全等級：1

用途限制：僅供科研3類

培養體系：DMEM高糖（不含丙酮酸鈉）+10%FBS+1%三抗

培養溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡介：小鼠角膜上皮細胞TKE2取自CD-1雌性小鼠，貼壁培養，不規則形態。

注釋：倍增時間36h

用途：細胞系

注意事項：僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）

細胞復蘇操作說明（針對凍存細胞）

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養箱 ，倒置顯微鏡 ，水浴鍋 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養基 ，胎牛血清 ，三抗

實驗材料：T25 細胞培養瓶 ，需復蘇的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實驗步驟：

1、從液氮罐中取出凍存管 ，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時搖動令其盡快融化。

2、從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子 ，移液槍吸出細胞懸液 ，加到離心管并滴加 5 倍以上培養基并混勻。

3、操作離心 ，調至 1000 轉/分 ，時長 10 分鐘

4、棄去上清液 ，重懸離心管底部細胞沉淀 ，在 T25 培養瓶中加入 5-6ml 培養基，計數 ，調整細胞密度，接種培養瓶 ，37℃培養箱靜置培養。

5、次日更換一次培養液，繼續培養。

6、注意：凍存細胞建議三管一起復蘇到一個 T25 培養瓶中

細胞傳代操作說明（貼壁細胞）

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗

實驗材料：T25 細胞培養瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實驗步驟：

1、細胞于培養箱中 ，愈合度達到 80% ，可進行傳代。

2、按 T25 培養瓶計 ，吸出培養基 ，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具體時間視細胞而定），后用培養基將細胞沖洗下來。 1000r/min 離心 10 min ，棄上清收集細胞，鋪至 2 個 T25 培養瓶中培養，各添加 7ml 培養基。

3、注意：消化時間不易過長，消化前血清成分務必去除干凈，終止消化請用新鮮培養基，原瓶培養基不可繼續使用（終止消化或傳代）。

細胞傳代操作說明（懸浮細胞）

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養箱，倒置顯微鏡 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養基 ，胎牛血清 ，三抗

實驗材料：T25 細胞培養瓶，需傳代的細胞，移液槍 ，槍頭，離心管

實驗步驟：

1、細胞于培養箱中，密度達到懸浮細胞傳代標準（沉降后可鋪滿底面），可進行傳代。

2、按 T25 培養瓶計，吹打均勻，吸出培養基，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細胞，鋪至 2 個T25 培養瓶中培養，各添加 7ml 培養基。

3、注意：原瓶培養基不可繼續使用（傳代）。

細胞凍存操作說明

實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機

實驗試劑：DMEM 培養基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO

實驗材料：T25 細胞培養瓶 ，需凍存的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管 ，凍存管 ，記號筆

實驗步驟：

1、取待凍存的細胞（按 T25 計 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用培養基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ，棄上清收集細胞。如果是懸浮生長的細胞，則可直接離心收集細胞。

2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細胞懸液。

3、細胞懸液裝入 3 支凍存管中。

4、凍存管在 4℃下存放 30 min ，轉放-20℃ 1.5～2 h ，再轉人-70℃ 4-12 h 后即可轉移到液氮內(- 196℃) ，并登記。

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