微生物新菌種的采樣與增殖及純化與性能鑒定！

百歐博偉生物：新的微生物菌種需要從自然生態(tài)環(huán)境中混雜的微生物群中挑選出來，因此必須要有快速而準(zhǔn)確的新種分離和篩選方法。分離微生物新種的具體過程大體可分為采樣、增殖、純化和性能測定等步驟。

1、采樣

根據(jù)篩選的目的、微生物分布情況、菌種的主要特征及其生態(tài)關(guān)系等因素，確定具體的時(shí)間、環(huán)境和目標(biāo)物進(jìn)行采樣。

土壤是微生物的大本營，菜園和耕作層土壤是有機(jī)質(zhì)較多的土層，常以細(xì)菌和放線菌為主；果園樹根土層中，酵母菌含量較高；動(dòng)植物殘?bào)w及霉腐土層中，分布著較多的霉菌。此外，豆科植物根系土中，往往存在根瘤菌；河流湖泊的淤泥中能分離到產(chǎn)甲烷菌；油田和煉油廠周圍土層中常見分解石油的微生物等。季節(jié)、表面的植被、溫濕、通風(fēng)情況、養(yǎng)分、水分、酸堿度和光照等都會(huì)影響土壤中的微生物分布，故在采土樣時(shí)應(yīng)予以重視。采土樣地點(diǎn)選好后，用小鏟子去除表土，取離地面5~15cm處的土樣幾克，盛于預(yù)先滅菌的牛皮紙袋中扎緊，并標(biāo)明時(shí)間、地點(diǎn)和環(huán)境等情況，以備查考。

各種水體也是工業(yè)微生物菌種的重要來源，許多具有光合作用能力的微生物及兼性或?qū)Ｐ詤捬跷⑸锒寄軓母鞣N水體中篩選得到。

2、增殖

一般采用增殖培養(yǎng)（又稱富集培養(yǎng)）的方法，以投其所好和取其所抗的原則在培養(yǎng)基中添加特殊的養(yǎng)分或抗菌物質(zhì)，使所需菌種的數(shù)量相對增加。其實(shí)質(zhì)是使天然樣品中的劣勢菌轉(zhuǎn)變?yōu)槿斯きh(huán)境中的優(yōu)勢菌，便于將它們從樣品中分離。

3、純化

增殖培養(yǎng)得到的微生物培養(yǎng)物仍是一個(gè)各類微生物的混合體。為了獲得某一特定的微生物菌種，必須進(jìn)行微生物的純化即純培養(yǎng)。

常用的菌種純化方法很多，大體可分為兩個(gè)層次，一個(gè)層次較粗放，一般只能達(dá)到“菌落純”的水平，從“種”的水平來說是純的，其方法有劃線分離法，涂布分離法和稀釋分離法。

①劃線分離法，簡便而快速，即用接種針挑取微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面劃線，適當(dāng)條件下培養(yǎng)后，獲得單菌落。

②涂布分離法，與劃線法類似，用涂布棒蘸取培養(yǎng)液，或先將少量培養(yǎng)液滴在固體培養(yǎng)基表面，再用涂布棒在固體培養(yǎng)基表面均勻涂布。

③稀釋分離法所獲得的單菌落更加分散均勻，獲得純種的概率較大。該法是將降至60℃左右的固體培養(yǎng)基與少量培養(yǎng)液(事先在培養(yǎng)液中加入無菌的玻璃珠攪拌打散細(xì)胞團(tuán)，再經(jīng)過濾處理，效果更佳。混勻后，再澆注成平板以獲取單菌落。

另一層次是較為精細(xì)的單細(xì)胞或單孢子分離法，它可達(dá)到細(xì)胞純即“菌株純”的水平。這種方法的具體操作的方法很多，的方法是利用培養(yǎng)皿或凹玻片等分離小室進(jìn)行細(xì)胞分離。也可以利用復(fù)雜的顯微操作裝置進(jìn)行單細(xì)胞挑取。如果遇到不長孢子的絲狀菌，則可用無菌小刀切取菌落邊緣稀疏的菌絲進(jìn)行分離移植，也可用無菌毛細(xì)管插入菌絲，以獲取單細(xì)胞。在具體的工作中，具體方法，應(yīng)視微生物的實(shí)際情況和實(shí)驗(yàn)條件而定。

為了提高分離篩選工作的效率，除增殖培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)控制增殖條件外，在純種分離時(shí)，也應(yīng)控制適宜的培養(yǎng)條件，并選用特異的檢出方法和篩選方案。

4、性能鑒定

菌種性能測定包括菌株的毒性試驗(yàn)和生產(chǎn)性能測定。若毒性大而且無法排除者應(yīng)予以淘汰。盡管在菌種純化中能獲得大量的目標(biāo)菌株，它們都具備一些共性，但只有經(jīng)過進(jìn)一步生產(chǎn)性能測定，才能確定哪些菌株更符合生產(chǎn)要求。

直接從自然界分離得到的菌株為野生型菌株。事實(shí)上，從自然界直接獲得的野生型菌種往往低產(chǎn)甚至不產(chǎn)所需的產(chǎn)物，只有經(jīng)過進(jìn)一步的人工改造才能真正用于工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)。所以，我們常將這些自然界中直接獲得的新菌株稱為進(jìn)一步育種工作的原始菌株或出發(fā)菌株。

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